INVESTIGADORES
GONZALEZ LEBRERO Rodolfo Martin
congresos y reuniones científicas
Título:
Oclusión de calcio en la Ca2+-ATPasa de membrana plasmática.
Autor/es:
M. FERREIRA GOMES; RODOLFO M GONZÁLEZ LEBRERO; RC. ROSSI; JPFC ROSSI
Reunión:
Congreso; XL reunión anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
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La bomba de Ca2+ de membrana plasmática
(PMCA) es una proteína integral cuya función es transportar calcio
hacia el exterior celular contra el gradiente electroquímico,
impulsado por la hidrólisis de una molécula de ATP por cada catión
transportado. El ciclo de reacción de la PMCA involucra
intermediarios fosforilados y transiciones conformacionales, tanto
entre formas fosforiladas (E1P↔E2P) como desfosforiladas (E1↔E2).
El Ca2+ se encontraría ocluido en la forma E1P luego de unirse a
sitios citoplasmáticos de la enzima y antes de ser liberado al
exterior celular, que ocurriría luego de la transición E1P→E2P[1].
El objetivo de este trabajo es estudiar
el mecanismo de transporte de calcio de la PMCA mediante la
caracterización de intermediarios con Ca2+ ocluido. Para esto
desarrollamos un procedimiento que permite medir la oclusión de Ca2+
en microsomas con hPMCA4b1. Esto incluye un sistema de sobreexpresión
de la Ca2+-ATPasa y el uso de un aparato de mezclado rápido
combinado con una cámara de filtrado[2], el cual permite el
aislamiento de la enzima y la posterior cuantificación del 45Ca2+
ocluido (Caocl).
Los resultados sugieren que: 1) el
calcio se ocluye en el intermediario E1P; 2) la oclusión de calcio y
la fosforilación de la enzima son eventos simultáneos; 3) los
coeficientes de velocidad de oclusión parecen no variar con la
[Ca2+] indicando que la oclusión de calcio no sería un paso
limitante del ciclo de reacción y 4) medidas de Caocl en presencia
de calmodulina (CaM), activador específico de la PMCA, produce una
disminución de la K0.5(Ca2+), este efecto también se observó en la
mutante PMCA(ct120), la cual carece del dominio de unión a CaM y por
esto, permanece continuamente activada.
Este trabajo constituye un nuevo
enfoque del estudio de la PMCA que permitirá la eventual descripción
de su funcionamiento en un modelo cinético y estructural detallado.
1. Ferreira-Gomes, M. S.,
González-Lebrero, R. M., de la Fuente, M. C., Strehler, E. E.,
Rossi, R. C., Rossi, J. P. (2011) J Biol Chem. 286, 32018-32025
2. Rossi, R. C., Kaufman, S. B.,
González-Lebrero, R. M., Nørby, J. G., Garrahan, P. J. (1999).
Anal. Biochem. 270, 276-285