DETERMINACIÓN ENZIMÁTICA DE LEVODOPA Y CARBIDOPA EN FARMACOS UTILIZANDO CALIBRACIÓN MULTIVARIADA CON DATOS ESPECTRALES DE SEGUNDO ORDEN

MARCOS GRÜNHUT; MARIANO GARRIDO; MARÍA E. CENTURIÓN; BEATRIZ S. FERNÁNDEZ BAND

Bahía Blanca

Congreso; V Congreso Argentino de Química Analítica; 2009

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

Levodopa (LVD) y carbidopa (CBD) son dos principios activos utilizados en conjunto para el tratamiento de la enfermedad de Parkinson [1]. La determinación cuantitativa de estos compuestos en preparaciones farmacéuticas comerciales resulta muy interesante dado que los mismos se encuentran juntos y en altas relaciones de concentración: 250/25, 200/50 y 100/25 mg de LVD/CBD, respectivamente. Los métodos oficiales para llevar a cabo su cuantificación suelen emplear cromatografía líquida de alta presión (HPLC). Sin embargo, se han propuesto numerosos métodos alternativos, los cuales utilizan técnicas como espectrofotometría UV-Vis e IR asistida por quimiometría, voltamperometría, potenciometría, electroforesis capilar y fluorescencia sincrónica, entres otras. También, dado que LVD y CBD son sustratos de la enzima Polifenol oxidasa (PFO; EC 1.14.18.1), se ha propuesto un método enzimático con detección espectrofotométrica. En dicho trabajo, se han aplicado distintos métodos de calibración multivariada (PLS, SPA-MLR) para resolver la superposición espectral existente [2]. Sin embargo, no han sido propuestos hasta el momento trabajos que utilicen datos de segundo orden. El objetivo del presente trabajo fue el desarrollo de un método enzimático de flujo continuo con detección espectrofotométrica para la determinación simultánea de LVD y CBD en fármacos utilizando datos espectrales de segundo orden. El método se basa en la oxidación de ambos analitos catalizada por la enzima PFO en medio de solución reguladora de fosfato de pH 7,0. Las matrices de datos de tres vías fueron generadas registrando los espectros UV-Vis (entre 288 y 600 nm) en función del tiempo para las distintas reacciones que involucran las mezclas de LVD/CBD con PFO, correspondientes al diseño experimental planteado y a las muestras de medicamento. Con estas matrices se construyeron cubos de datos, los cuales fueron estudiados mediante Análisis Paralelo del Factor (PARAFAC) de tres vías, utilizando la restricción de no-negatividad en los tres modos (espectros, concentración y perfil cinético). El valor de core consistency obtenido fue de 77 %, el porcentaje de varianza explicada 99,8 % y el error global de predicción del modelo 1,45 %. Los valores de concentración obtenidos para las muestras fueron contrastados con aquellos obtenidos por el método de referencia (HPLC) [3], no encontrándose diferencias significativas (α = 5 %). el error global de predicción del modelo 1,45 %. Los valores de concentración obtenidos para las muestras fueron contrastados con aquellos obtenidos por el método de referencia (HPLC) [3], no encontrándose diferencias significativas (α = 5 %). core consistency obtenido fue de 77 %, el porcentaje de varianza explicada 99,8 % y el error global de predicción del modelo 1,45 %. Los valores de concentración obtenidos para las muestras fueron contrastados con aquellos obtenidos por el método de referencia (HPLC) [3], no encontrándose diferencias significativas (α = 5 %).α = 5 %).