INQUISUR   21779
INSTITUTO DE QUIMICA DEL SUR
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Evaluación de la interacción de preosteoblastos MC3T3-E1 sobre titanio implantable asistida por el uso combinado de microscopías de luz blanca reflejada y de epifluorescencia
Autor/es:
CAJIAO CHECCHIN, VALENTINA CHIARA; GRAVINA, ANABELA; FERNÁNDEZ LORENZO, MONICA ; FAGALI, NATALIA
Lugar:
La Falda
Reunión:
Congreso; 5 Congreso Argentino de Microscopia SAMIC 2018; 2018
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microscopia
Resumen:
Las interacciones entre células y biomateriales han sido tradicionalmente examinadas en términos de funciones celulares (viabilidad, actividad metabólica, diferenciación), que luego se correlacionan con las propiedades del biomaterial. Sin embargo, el análisis de estas funciones no es suficiente para caracterizar la nueva generación de materiales bioactivos, cuyo estudio requiere un abordaje integral de los fenómenos de adhesión celular, supervivencia, morfología,migración y crecimiento. El microscopio invertido es una herramienta de uso frecuente para la observación de células vivas en cultivo, dado que permite obtener imágenes a través de soportes transparentes (placas de Petri, multi-well, portaobjetos, entre otros). Los estudios del comportamiento celular en microambientes más complejos, como es el caso de los biomateriales metálicos (opacos), reducen la aplicabilidad de la microscopía óptica convencional.El presente trabajo describe la aplicación de la técnica de microscopía óptica de epifluorescenciapara revelar la distribución de marcadores visuales intracelulares que actúen como descriptorespara la caracterización cuali- y cuantitativa de la interacción entre pre-osteoblastos MC3T3-E1 ysustratos de Titanio (Ti) c.p. grado 2 para su aplicación en implantes óseos.La observación microscópica utilizando luz blanca reflejada (Figura 1.a.) reveló los aspectossuperficiales del metal (bordes de grano principalmente), pero no se evidenciaron las célulasadheridas a su superficie. En cambio,la tinción con DAPI permitió evaluar la densidad de célulasadheridas (352 células/mm2) y el aspecto de los núcleos (figura 1.b.). La tinción con faloidina, porsu parte, puso de manifiesto la morfología poligonal y aplanada típica de este tipo celular, y ladistribución cuasi paralela de los filamentos de actina, sugiriendo una orientación preferencial delcitoesqueleto de la célula en función de la superficie de contacto. También fue posible observar lapresencia de puntos de adhesión focal e interacción entre células (flechas rojas y blancasrespectivamente, figura 1.c.). Ambas imágenes combinadas (figura 1.d.) permiten determinar laubicación del núcleo en el centro de cada célula (flechas amarillas).2/3En conclusión, la combinación de la microscopía por luz blanca reflejada y la de epifluorescenciapermite establecer correlaciones entre las propiedades superficiales del material opaco (presenciade hoyuelos, mesetas, surcos, películas superficiales, productos de corrosión, etc.) y los cambios anivel biológico (distribución y morfología celular, direccionamiento de los filamentos de actina,frecuencia de puntos de adhesión focal e interacción entre células, etc.) lo que permitirá obtenerun conocimiento más profundo de los fenómenos asociados a la interacción célula-biomaterial