ESTUDIO POR MALDI-TOF DE LAS CADENAS LIPÍDICAS CARBONADAS DE LA PARED DE MICOBACTERIAS AMBIENTALES. POTENCIAL IMPLICANCIA EN ALGUNAS CAPACIDADES BIOLÓGICAS

ORIANI, A.; GENTILI, A.; ZUÑIGA, A.; TORTONE, C; ORIANI, D; BALDINI, M.

Cordoba

Jornada; Jornadas Argentinas de Microbiología.; 2014

AAM

Las micobacterias ambientales (MA) continúan siendo una causa muy importante de morbi-mortalidad, especialmente en países con recursos sanitarios limitados. Una de sus principales características es la complejidad de sus estructuras de cubierta. Análisis químicos han demostrado que están rodeadas por una capa externa que contiene ácidos micólicos covalentemente unidos a un complejo de lipo-arabinogalactano-peptidoglicano, al que se anclan lípidos, glicolípidos y glicopeptidolípidos. Numerosos estudios sugieren que la arquitectura de la pared jugaría un rol importante en procesos como la movilidad por sliding y la formación de biofilm. El objetivo del trabajo fue analizar los componentes lipídicos de la pared de tres MA por MALDI-TOF (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time-of-Flight) y relacionarlos con la capacidad de formar biofilm y movilidad por sliding. Se estudiaron cepas obtenidas de crecimiento planctónico de Mycobacterium gordonae y M. porcinum aisladas de agua de red y de M. smegmatis cepa de referencia. Se extrajeron los micolatos totales de cada cepa y se analizaron ésteres metílicos del ácido micólico (MAME) por MALDI-TOF. Para el ensayo de movilidad por sliding se sembró una colonia de cada cepa en una caja de Petri con medio Middlebrook 7H9 (MB) con glicerol y 0,3% de agar. Las cajas se sellaron e incubaron 15 días a 30ºC. Para evaluar la capacidad de formar biofilm in vitro se sembraron inóculos estandarizados de las MA en policubetas de PVC. Se adicionó el medio MB. Luego de 20 días de incubación a 30ºC, los pocillos se lavaron con agua estéril, se tiñeron con cristal violeta (30 minutos a 25ºC), se enjuagaron con agua y se secaron sobre papel. El colorante incorporado al biofilm se resuspendió en etanol-acetona (70:30). La cuantificación se realizó con un lector de microplacas a 595 nm. Los perfiles de los espectros MALDI TOF de las cepas M.smegmatis y M.porcinum permitieron observar una señal destacada a m/z 869, compatible con MAMEs de cadena corta de hasta C58. Sin embargo, M. gordonae presentó además de algunas señales compatibles con cadenas de hasta C53, señales entre m/z 1046 y 1515 atribuíbles a MAMEs de cadenas largas (C72 a C105). M.smegmatis y M.porcinum formaron un consistente biofilm (2,57 y 1,48 DO respectivamente) y mostraron capacidad para moverse por sliding. M. gordonae formó un biofilm débil (0,3 DO) y no se deslizó. Los resultados de las especies estudiadas sugieren que las diferencias de longitud de los ácidos grasos de la pared, estarían relacionadas con la capacidad para formar biofilm y deslizarse por sliding. La bibliografía asocia la formación de biofilm por M. smegmatis con una elevada síntesis de ácidos grasos de cadena corta (C56 -C68). La ausencia de MAMEs de C56 a C68 en M.gordonae podría contribuir a su pobre formación de biofilm. Los resultados obtenidos para M. smegmatis y M. porcinum permitirían extrapolar lo descripto por la bibliografía a otras MA presentes en el agua de bebida