Presencia y diversidad del gen arsB en distintos sistemas de lagunas de los Andes

MOTOK, J; LARA, J; FERRERO MA; FARÍAS ME

Buenos Aires

Congreso; IV Congreso Argentino de Microbiología General; 2007

SAMIGE

Las lagunas y salares de los Andes son ambientes de condiciones extremas, debido a las altas radiaciones que soportan, las elevada concentraciones de metales tóxicos como arsénico, las temperaturas extremas, etc. Las lagunas estudiadas en el presente trabajo contienen diferentes concentraciones de arsénico siendo muy altas en algunas (0.046 a 28 mg/l). El sistema de resistencia a arsénico más disperso entre las bacterias es el sistema de bombeo de arsenito codificado por el operón ars, en el cual gen arsB codifica una bomba de eflujo, y pueden diferenciarse diversas familias de este gen. En este estudio se buscó la presencia de este gen en dos lagunas de los andes chilenos: Chaxas y Turquesa (3700 - 4300 m.s.n.m.) y en cinco lagunas de los andes argentinos: Azul, Verde, Aparejo, Negra y Vilama (4300 - 4700 m.s.n.m.). Muestras de sedimentos de las tres lagunas con mayor concentración de arsénico (9.62 mg/l Chaxas; 28 mg/l Turquesa; 11.8 mg/l Vilama) fueron incubadas en 16 diferentes condiciones de cultivo, variando temperatura, condiciones de oxigenación, concentración y especiación de arsénico. A distintos tiempos se tomaron muestras de ADN de las comunidades presentes en estos cultivos. Estas muestras de ADN de comunidades junto con más de 100 aislamientos provenientes de las siete lagunas fueron analizadas en este estudio. Para el análisis por PCR se utilizaron cebadores previamente diseñados para bacterias Gram (-) y otro para Gram (+) en base a secuencias del gen arsB en elementos genéticos móviles. Estos mismos cebadores se utilizaron para obtener dos fragmentos del gen arsB de aproximadamente 760 y 900 pb, pertenecientes a familias diferentes, que fueron utilizados como sonda en ensayos de Dot Blot. Se demostró la presencia de este gen en aproximadamente el 30% de los aislamientos, los cuales pertenecían a seis de las siete lagunas ensayadas, presentando igual frecuencia de cada familia. Aproximadamente el 31% de las muestras de ADN de comunidades provenientes de diversas condiciones de cultivo mostraron la presencia del gen arsB de bacterias Gram (-). Sin embargo, el gen arsB de Gram (+) fue encontrado en una única condición de cultivo en el ADN de las comunidades enriquecidas a partir de muestras de las tres lagunas. Estos resultados indican la ubicuidad del gen arsB en los sistemas de lagunas de la puna andina y la diversidad de estas familias en un ambiente proclive a la dispersión de estos genes de resistencia.