Primera evidencia de una proteína de tipo glutarredoxina en Entamoeba histolytica

BIROCCO, F; IGLESIAS, AA; GUERRERO, SA; GONZALEZ, LN; ARIAS, DG

Reunión virtual

Congreso; SAP XXXII Reunión Anual; 2020

Sociedad Argentina de Protozoología

El parásito intestinal Entamoebahistolytica es el agente causal de la amebiasis. Este protozoo vive y semultiplica en el interior del intestino humano. Sin embargo, durante lainvasión a tejidos, E. histolytica se encuentra expuesta a cantidadeselevadas de especies reactivas exógenas. Hasta el momento, no se ha detectadola síntesis de glutatión ni de enzimas asociadas a su metabolismo en elparásito. Aquí presentamos la caracterización funcional de una proteína de tipoglutarredoxina monotiólica de E. histolytica (EhGrx1). Ensayosbioquímicos mostraron que EhGrx1 fue capaz de catalizar la reducción invitro de disulfuros de baja masa molecular. La proteína recombinante obtenidaen Escherichia coli presentó una estructura apo-monomérica; sin embargo,una forma holo-proteica se obtuvo mediante complementación del medio de cultivocon citrato férrico y cisteína. La habilidad de unir centros ferrosulfurados(ISCs) fue evaluada por espectroscopía UV-Vis y cromatografía de filtración porgeles, mostrando que EhGrx1 podría unir ISC. La holo-EhGrx1 noexhibió actividad, sugiriendo que la Cys catalítica estaría involucrada en launión de ISC. Evaluamos por western blot y microscopía confocal laabundancia relativa y localización de EhGrx1, respectivamente, encélulas de E. histolytica expuestas a agentes oxidantes exógenos y ametronidazol. Los resultados mostraron un incremento de los niveles de proteínarespecto a las células no tratadas. Además, llevamos a cabo bioensayos detoxicidad utilizando células de E. coli recombinante. Los datos mostrarondiferencias significativas en los IC50 para H2O2 comparandolas células no expresantes respecto de las expresantes de EhGrx1. Estosresultados sugieren que EhGrx1 podría estar involucrada en la protecciónfrente a estrés oxidativo y nitrosativo en este parásito. Para nuestro entendery saber, esta es la primera caracterización de este tipo de proteínas en E.histolytica.