Caracterización funcional de una metionina sulfóxido reductasa hibrida de Trypanosoma cruzi

GUERRERO, SA; BIROCCO, F; ARIAS, DG; GONZALEZ, LN; IGLESIAS, AA

Reunión virtual

Congreso; SAP XXXII Reunión Anual; 2020

Sociedad Argentina de Protozoología

Lametionina es un aminoácido susceptible a oxidarse a metionina sulfóxido(MetSO). La reducción de MetSO a metionina está catalizada por la enzimametionina sulfóxido reductasa (MSR), presente en casi todos los organismos. Trypanosomacruzi, el agente etiológico de la enfermedad de Chagas, es auxótrofo enmetionina. A través de un análisis de su genoma, identificamos una secuenciacodificante para la metionina sulfóxido reductasa libre (fMSR), una proteínasolo presente en organismos unicelulares. En T. cruzi, esta proteínaestá constituida por un dominio de tipo GAF fusionado al dominio TIP41(homólogo a TIP41 de levadura el cual está involucrado en la regulaciónnegativa de la vía TOR en la levadura). La secuencia codificante del dominioGAF se expresó en Escherichia coli y la proteína recombinantecorrespondiente se purificó y caracterizó funcionalmente. La proteínarecombinante exhibió actividad MSR con el isómero L-Met(R)SO y triparredoxinas y tiorredoxina de T. cruzi comosustratos reductores. Por otro lado, se realizó un ensayo de complementación delevaduras utilizando una mutante Δtip41.Los resultados mostraron que TcfMSR(tanto el dominio TIP41 aislado como la proteína completa) podría compensar elfenotipo sensible a la rapamicina. Este resultado indica que la TcfMSR es activa, actuando negativamenteen la vía TOR de levadura.  Se realizó unensayo de doble hibrido en levaduras con el dominio TIP41 y la proteína TAP42 (unposible interactor de TIP41 en T. cruzi), observándose interacción deestas proteínas. Se evaluó también el efecto de fármacos inhibidores de la víaTOR (rapamicina y AZD8055) sobre el crecimiento de epimastigotes de T. cruzi.Se observó que ambos compuestos generan una disminución en el crecimiento delparásito. Estos resultados sugieren que la TcfMSRes un posible vínculo entre el metabolismo redox y la vía TOR en T. cruzi.