IAL   21557
INSTITUTO DE AGROBIOTECNOLOGIA DEL LITORAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
HASTY: DE EXPORTINA A CO-FACTOR DE LA BIOGÉNESIS DE MICRO RNAS
Autor/es:
ARCE A.L.; MANAVELLA, P.A.; LEI L.; CAMBIAGNO D.A.; WEIGEL D.
Reunión:
Jornada; XXII Jornadas Científicas - Sociedad de Biología de Córdoba; 2019
Resumen:
Los micro ARNs (miARNs) son moléculas de 21 nucleótidos generadas a partir de miARN primarios (pri-miARNs). Tal como los ARN mensajeros, los pri-miARN son transcriptos por la ARN polimerasa II y componentes de los complejos Mediator y Elongator. Una vez generados, estos transcriptos son reconocidos y procesados por SERRATE (SE), HYPONASTIC LEAVES 1 (HYL1) y DICER LIKE 1 (DCL1), entre otras, hasta generar un miARN maduro doble hebra. En plantas, a diferencia de animales, todos los pasos de la biogénesis de miARNs ocurren en el núcleo. En el citoplasma, una de las hebras del dúplex guía el silenciamiento post-transcripcional de sus blancos a través de AGO1. Un estudio reciente sugiere que AGO1 exporta miARNs maduros desde el núcleo hacia el citoplasma. Hasta ese momento, se postulaba que HASTY (HST) era la exportina encargada de esa actividad. Plantas mutantes hst presentan una marcada disminución en los niveles de miARNs. Sin embargo, no existen evidencias que relacionen directamente a HST con la exportación de miARNs desde el núcleo. Por lo tanto, nos propusimos identificar el mecanismo por el cual HST modula la abundancia de los miARNs en Arabidopsis thaliana. En primer lugar, por medio de fraccionamientos subcelulares de núcleos/citoplasma seguido de Northern blots en plantas salvajes y en mutantes ago1 y hst, encontramos evidencias que avalan el transporte de miARNs desde el núcleo al citoplasma mediado por AGO1. Por el contrario, ninguno de nuestros resultados sugieren que HST sea la exportina de miARNs de Arabidopsis. Por otro lado, por medio de microscopía confocal, identificamos que la localización subcelular de HST es principalmente nuclear, pero depende de RAS-RELATED NUCLEAR PROTEIN-1 (RAN-1) y posiblemente de IMPORTIN ALPHA ISOFORM 2 (IMPA-2), sugiriendo que podría actuar como exportina/importina de otros cargos (proteínas o ARN). Por medio de smRNA-seq, RNA-seq y qPCR corroboramos que las mutantes hst tienen los niveles de miARNs maduros disminuidos. Por el contrario, dichas mutantes acumulan pri-miARNs no procesados, indicando que HST es necesaria para el procesamiento de estos precursores. Además, por medio de co-inmunoprecipitaciones seguidas de LC-MS/MS y BiFC, identificamos que HST interactúa con DCL1 a través de su dominio amino-terminal, y con componentes del complejo Mediator a través de su dominio carboxilo-terminal. A su vez, los resultados muestran que DCL1 y Mediator interactúan entre sí, pero HST estabilizaría este complejo proteico. Finalmente, experimentos de ChIP-qPCR mostraron que HST es necesaria para que DCL1 se una a la cromatina de genes MIR. Si bien HST fue sugerida como la exportina de miARNs, nosotros no podemos avalar esa función pero proponemos que es necesaria para estabilizar un complejo que involucra a DCL1 y Mediator, posicionando a HST como un factor de la biogénesis de miARNs a nivel co-transcripcional.