Estudio del rol de las cisteínas en la oligomerización y funcionalidad de la proteína triparredoxina peroxidasa citosólica de Trypanosoma cruzi

PIÑEYRO, MARÍA DOLORES; LOPEZ, LUCÍA; ARIAS, DIEGO G.; PARODI-TALICE, ADRIANA; ROBELLO, CARLOS

Santa Fe

Congreso; SAP XXVIII Reunión Anual; 2016

Trypanosoma cruzi invadediferentes tipos celulares del hospedero, donde sufre la exposición a especiesreactivas del oxígeno. Como defensas antioxidantes presentan varias enzimas,destacándose las triparredoxinas peroxidasas (TXNPx), enzimas de la familiaperoxirredoxinas de 2 cisteínas (Cys). Previamente, resolvimos la estructuratridimensional de TXNPx citósolica de T. cruzi (cTXNPx), caracterizamos suactividad enzimática y demostramos que constituye un factor de virulencia de T.cruzi. Del análisis de cTXNPx surge que esta proteína presenta diferencias conotros miembros de la familia con los cuales presenta alta identidad desecuencia. Particularmente, cTXNPx posee 7 residuos de Cys, incluyendo las 2Cys catalíticas (C52 y C173). Analizando la estructura tridimensional de laproteína, encontramos que dos cisteínas, C57 y C111, se hallan expuestas alsolvente. Cabe destacar que C57, muy cercana a la C52 peroxidática, seencuentra únicamente en especies de Trypanosoma y algunas bacterias, peroausente en las Prdx1 y Prdx2 humanas, como tampoco lo está la C111. El objetivodel trabajo fue estudiar la importancia de los residuos de cisteína en laactividad y en el estado oligomérico de la enzima en condiciones de oxidación yreducción. Para ello, construimos proteínas mutantes en las Cys: cTXNPxC52S,cTXNPxC57S, cTXNPxC111S y cTXNPxC173S, que fueron expresadas y purificadas. Laoligomerización en condiciones de oxidación, sobre-oxidación y reducción fueestudiada por gel filtración y electroforesis en condiciones nativas. Losresultados muestran que las cTXNPx salvaje y mutantes forman oligómeros de altopeso molecular, aunque muestran diferencias en los cambios de oligomerizaciónen respuesta a tratamientos con H2O2. En particular, el mutante en C57 formaagregados de alto peso molecular en todas las condiciones estudiadas.Estudiamos la actividad enzimática de los mutantes y observamos que la mutaciónen C111 no afecta la actividad de la enzima, y la mutación en C57 presentamenor actividad que la proteína salvaje. Estudiamos si la cTXNPx presentafunción chaperona en ensayos de agregación térmica de citrato sintasa, endistintas condiciones de oxidación-reducción, mostrando que la misma presentaactividad chaperona. Los resultados de este trabajo permiten seguirprofundizando la caracterización de una proteína que es un factor de virulenciapara T. cruzi.