Potencial replicativo total y distribución genómica entre viriones brotados y viriones ocluidos durante la replicación de baculovirus en cultivos de células de insectos.

EBERHARDT I.; AMABLE G. F.; MICHELOUD G. A.; GIORIA V. V.; CLAUS J. D.

CABA

Encuentro; XXXIII Reunión Científica Anual- Sociedad Argentina de Virología; 2013

Sociedad Argentina de Virología

Los baculovirus (familia Baculoviridae) son virus específicos de artrópodos que se caracterizan por presentar un ciclo de replicación bifásico que da origen a dos progenies diferentes que comparten la misma nucleocápside y genoma: los viriones brotados (BVs) y los viriones ocluidos (OVs) retenidos en cuerpos de oclusión (OBs), la progenie viral con capacidad insecticida. La producción in vitro de OBs implica la infección de cultivos de células de insecto susceptibles con un inóculo de BVs y como resultado de la replicación viral se obtiene BVs y OBs. Teniendo en cuenta que un proceso de producción in vitro a gran escala de OBs debe necesariamente incluir etapas previas de amplificación del inóculo de BVs, y que el potencial replicativo total de los baculovirus puede distribuirse en dos progenies virales diferentes, surge la necesidad de conocer, además de las condiciones óptimas que maximizan la replicación viral, las condiciones que permitan orientar la replicación viral hacia la progenie de interés en cada etapa del proceso. El objetivo de este trabajo fue estudiar la distribución de BVs y OVs, cuantificados mediante qPCR, durante la replicación viral en cultivos de células de insecto. Para ello, empleando un diseño del tipo factorial completo de dos factores a dos niveles, cultivos en suspensión de la línea celular saUFL-AG-286, en el medio libre de suero UNL-10, se infectaron con el Virus de la poliedrosis nuclear múltiple de Anticarsia gemmatalis (AgMNPV), utilizando dos valores diferentes de MOI (0,1 y 0,01 TCID50.célula-1) y de DCI (1,5 y 6,0x105 células.mL-1). Todos los experimentos fueron realizados por duplicado, y los resultados fueron analizados por ANOVA. La cantidad de OVs ocluidos, que vario entre 33 y 206 OVs.OBs-1, se vió afectada por la MOI y DCI, aunque el nivel de oclusión dependió de la combinación de niveles de ambos factores. La producción volumétrica de OVs solo fue afectado por la interacción de MOI y DCI, mientras que la producción específica de OVs por célula se redujo en promedio 4,7 veces al incrementar la DCI. Por otro lado, la producción volumétrica y específica de BVs oscilo entre 7,82x107-1,72x109 particulas.mL-1, y 59-7310 particilas.cel-1, respectivamente, siendo la DCI el factor de mayor significación y efecto negativo.