La producción de viriones brotados y cuerpos de oclusión de baculovirus en cultivos de células de insecto es afectada de manera diferencial por las variaciones en los parámetros de infección

EBERHARDT I.; AMABLE G.; GIORIA V.; MICHELOUD G.; CLAUS J. D.

Valle Hermoso

Encuentro; XXXI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2012

La replicación de los baculovirus (familia Baculoviridae) origina dos tipos de viriones diferentes, que comparten la misma nucleocápside: los viriones brotados (BVs) y los viriones ocluidos (OVs). Estos últimos son retenidos en los cuerpos de oclusión (OBs), la progenie viral con capacidad insecticida. La producción de dos tipos de viriones impone como consecuencia que el potencial replicativo total de los baculovirus debe fraccionarse entre las dos progenies. Un proceso de producción a gran escala de baculovirus insecticidas en cultivos de células de insecto necesariamente debe incluir una etapa final de producción de OBs, precedida por una sucesión de etapas de amplificación del stock de BVs. Por tanto, en las diferentes instancias de un proceso sería conveniente poder orientar la replicación viral hacia la producción de una u otra progenie, dependiendo del objetivo de cada etapa. Para ello, es preciso determinar si la distribución del potencial replicativo es sensible a la variación de parámetros de proceso que puedan ser manipulados. El objetivo de este trabajo fue estudiar la influencia de la variación de dos parámetros fácilmente manipulables, la multiplicidad de infección (MOI) y Ia densidad celular al momento de la infección (DCI), sobre la distribución de la producción de BVs y OBs, utilizando como modelo la infección de cultivos en suspensión de la línea saUFL-AG-286 con el virus de la poliedrosis nuclear múltiple de Anticarsia gemmatalis (AgMNPV), en el medio libre de suero UNL-10. Para ello, se infectaron cultivos utilizando dos valores diferentes de MOI (0,1 y 0,01 TCID50.célula-1) y de DCI (1,5 y 6,0x105 células.mL-1), siguiendo un diseño experimental de tipo factorial completo de dos factores a dos niveles, evaluándose como respuestas experimentales los rendimientos volumétrico y específico de OBs y BVs. Todos los experimentos fueron realizados por duplicado, y los resultados fueron analizados por ANOVA. La misma combinación de parámetros (DCI 1,50x105 células.mL-1, MOI 0,01 TCID50.célula-1) permitió obtener los máximos rendimientos volumétricos de BVs (1,90x109 TCID50.mL-1) y OBs (1,20x108 OBs.mL-1). Los rendimientos específicos de ambas progenies se redujeron significativamente cuando se incrementó la DCI de 1,5 a 6,0x105 células.mL-1, pero el efecto fue notable sobre la producción por célula de BVs, cuyo título decayó, en promedio, casi 200 veces, mientras que la producción específica de OBs sólo se redujo 6 veces. Por otro lado, los efectos asociados a las variaciones en la MOI, dentro del rango de valores analizado, resultaron de menor significación. Estos resultados sugieren que las condiciones de infección óptimas para la producción de ambas progenies virales son similares, pero que el alejamiento de esas condiciones produce un cambio en la distribución de los productos de la replicación, que se orienta a la preservación de la producción de OBs en detrimento de la producción de BVs.