Caracterización y análisis funcional del integron de clase 2 Tn7::In2-8 descripto en 3 aislamientos de Acinetobacter baumanni

RAMÍREZ MS; CENTRÓN D

España

Jornada; VI Reunión del Grupo de Microbiología Molecular de la Sociedad Española de Microbiología; 2006

Asociacion Española de Microbiologia

Los integrones de clase 2 portan cassettes de resistencia antibiótica involucrados en la transferencia horizontal de genes, y en su zona 3’ conservada poseen genes involucrados en la transposición, confieréndoles la capacidad de diseminación entre las especies bacterianas gram-negativas. Hasta el presente sólo han sido descripto los siguientes integrones de clase 2: Tn1825 ,Tn1826, Tn4132, Tn7::ISI-ereA, integrón con nº de acceso AB161461, Tn7::In2-1 y Tn7::In2-8. La baja cantidad de integrones de clase 2 descriptos a la fecha se atribuye a que el gen de la integrasa de clase 2 es un pseudogen, por lo cual no es funcional. De todos ellos, el integrón mas ampliamente distribuido entre las especies bacterianas es el transposón Tn7. Resultados previos de nuestro laboratorio nos llevaron a la identificación del integrón Tn7::In2-8 en 3 aislamientos clínicos multiresistentes de Acinetobacter baumannii. Él mismo posee las siguientes características: i) posee el mayor número de cassettes en la zona variable de los integrones de clase 2, ii) posee en la zona variable el cassette aadB y el pseudo-cassette catB2, no descriptos con anterioridad en el contexto de los integrones de clase 2, y iii) posee una repetición del cassette sat2 (sat2-aadB-catB2(DattC)-dfrA1-sat2-aadA1-orfX). El análisis de la secuencia de dicho integrón, reveló que la adquisición pseudo-cassette catB2 fue a través de un mecanismo no dilucidado aún, en el cual puede haber estado involucrada la recombinación ilegítima mediada por alguna integrasa.   En el presente trabajo hemos estudiado en profundidad dicho elemento, viendo la expresión de los cassettes de resistencia y a su vez evaluando la funcionalidad de catB2(DattC)-dfrA1 para evidenciar si se comporta como un módulo o si la integrasa es capaz de escindir el pseudo-cassette y el cassette en forma independiente. Para la expresión de los cassettes y pseudo-cassettes utilizamos la técnica de RT-PCR y para evaluar como es la escisión de la zona catB2(DattC)-dfrA1, se clonó el fragmento aadB-catB2(DattC)-dfrA1-sat2 en el vector pACYC184 para luego realizar los ensayos de escisión de cassettes según lo descrito por Gravel A et al, 1998. En cuanto a los resultados obtenidos vimos expresión de todos los cassettes de resistencias contenidos en el integrón Tn7::In2-8, como así escisión del pseudo-cassette catB2, del módulo catB2(DattC)-dfrA1 y del cassette dfrA1, demostrando que la integrasa de clase 1 es capaz de escindir al pseudo-cassette. Estudios posteriores de expresión son necesarios para caracterizar y localizar al promotor de dicho elemento como así el sitio de recombinación attI2. El estudio de la funcionalidad de los cassettes que se localicen en la zona variable de los integrones de clase 2 nos permitirá evaluar la capacidad de dispersión de cassettes de resistencia a antibióticos en presencia de otras integrasas, convirtiendo a este elemento en reservorio de cassettes de resistencia y contribuyendo a la dispersión de la multiresistencia.