INVESTIGADORES
CASTILLA LOZANO Maria Del Rocio
congresos y reuniones científicas
Título:
Complejo enzimático de proteínas quinasa y fosfatasas mitocondriales en la regulación del transporte de colesterol en la esteroidogénesis
Autor/es:
PODEROSO, CECILIA; DUARTE, ALEJANDRA; CASTILLA, ROCÍO; PAZ, CRISTINA; PODESTÁ, ERNESTO J.
Lugar:
Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Congreso; LIV Reunión científica anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).; 2009
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).
Resumen:
Hemos demostrado la presencia de un complejo enzimático
formado por las proteínas quinasas, PKA/MEK/ERK en la
mitocondria de células esteroidogénicas. Este complejo, en presencia
de colesterol, permite la fosforilacion transitoria de ERK y
de la proteína StAR (Steroidogenic Acute Regulatory protein) obligatorias
para el transporte de colesterol de la membrana
mitocondrial externa a la interna, paso limitante en la esteroidogénesis.
Dada la fosforilacion transitoria de ERK y StAR postulamos
que proteínas fosfatasas jugarían un papel en el balance
de fosforilacion regulando así el inicio y el cierre de la respuesta
esteroidogénica. En el presente trabajo se observó por
inmunocitoquímica y Western Blot la presencia de fosfatasas MKP1
y PP2A en mitocondria de células de Leydig de la línea MA-10. La
desfosforilacion de ERK mitocondrial por activación de fosfatasas
se produce luego de 2 hs de estimulación con un análogo del AMPc
(8Br-AMPc) (control: 6,79 ± 0,3 vs 8Br-AMPc: 2,7 ± 0,09 p < 0,001
en Unidades Arbitrarias (UA) fosfo-ERK/ERK total). Utilizando un
disipador del potencial de membrana mitocondrial (carbonyl cyanide
chlorophenyhidrazone, CCCP) que afecta el procesamiento de
StAR a su forma madura (30 kDa), se observó que ERK no es
desfosforilada cuando interactúa con la proteína StAR, aun con la
fosfatasa activa (8Br-AMPc+CCCP 2hs/3hs CCCP: 0,54 ± 0,03 vs
8Br-AMPc+CCCP 2hs/3hs medio: 2,34 ± 0,1, p < 0,001 en UA fosfo-
ERK/ERK total). Esto se observa debido a la presencia de StAR
30 kDa cuando se remueve el CCCP del medio de cultivo. La ausencia
o presencia de StAR 30 kDa que une colesterol y es sustrato
de ERK regula la acción de la fosfatasa sobre ERK en la
mitocondria. Estos estudios nos permiten sugerir que la velocidad
de síntesis de esteroides esta regulada a nivel mitocondrial por el
balance en la fosforilación de ERK y StAR vía la activación de PKA
y la regulación de la actividad de fosfatasas por la presencia de la
forma madura de la proteína StAR.
