Estudios histopatológicos y del transcriptoma de la interacción entre Phakopsora pachyrhizi y Glycine max

NATALIA FERNANDEZ ERASO, M. PAULA FILIPPONE, VICTORIA GONZÁLES, MARTA E. ARIAS, M. GABRIELA GARCÍA, ESTEBAN SIR, PATRICIA PICARDO, SERGIO GHIO, DANIEL PLOPER, ALEJANDRO MENTABERRY, ATILIO CASTAGNARO

Viña del Mar, Chile

Congreso; RedBio 2007; 2007

RedBio

P. pachyrhizi es un hongo biotrófico obligado que afecta a la soja al fin de ciclo del cultivo. La enfermedad causa cuantiosas pérdidas en los países del Cono Sur y solo puede ser controlada mediante la aplicación preventiva de fungicidas. Como una primera etapa de un proyecto dirigido a identificar y caracterizar genes involucrados en la interacción temprana entre la roya asiática de la soja (P. pachyrhizi) y el hospedante G. max se puso a punto un sistema de infección de soja por P. pachyrhizi en condiciones controladas. Las inoculaciones se realizaron en la Estación Experimental Agroindustrial Obispo Colombres, utilizando inóculos colectados a campo. Para realizar los ensayos, se seleccionó un inóculo de elevada virulencia procedente de la localidad de Rapelli (Tucumán). En ensayos preliminares, se estableció una concentración óptima de 2 x 105 esporas/ml. Se infectaron plantas de soja de la variedad A8000 en un estado fenológico V4 (cuarto nudo de hoja trifoliada). Se evaluaron las condiciones de luz, humedad y temperatura durante la infección, definiendo como óptimo un período de 24 h en oscuridad con una temperatura de 21-22ºC y 90-93% de humedad relativa (HR). La infección prosiguió con un fotoperíodo de 12 h luz, a  25-27ºC y con 80-90% de HR. Para definir tiempos críticos en la interacción, se realizó un seguimiento microscópico extrayendo muestras durante 16 días a partir de la inoculación, observándose las estructuras fúngicas esperadas para los estadíos iniciales de la enfermedad. A las 3 h de la infección se encontraron tanto uredosporas con tubos germinativos de longitudes variables y apresorios con diferentes morfologías, como puntos de entrada del patógeno sin formación de apresorios. Luego de las primeras 48 h se observaron haustorios, y a los 16 d.p.i. se desarrollaron pústulas. Luego se extrajo ARN total en los tiempos previamente definidos (3, 24 y 48 h post-inoculación) para la construcción de bibliotecas sustractivas. Como población drivers se utilizaron ADNc de esporas germinadas en agua y ADNc de plantas no infectadas.