INVESTIGADORES
CAMPERI Silvia Andrea
congresos y reuniones científicas
Título:
PURIFICACIÓN DE FOSFOLIPASA A 2 A PARTIR DE VENENO DE SERPIENTE Crotalus durissus terrificus UTILIZANDO UN FOSFOPÉPTIDO
Autor/es:
S. L. SAAVEDRA; G. ACOSTA; L ÁVILA; S. L. GIUDICESSI; S. A. CAMPERI; F. ALBERICIO; O. CASCONE; M. C. MARTÍNEZ CERON
Reunión:
Jornada; Jornadas de Farmacia y Bioquímica Industrial; 2019
Resumen:
INTRODUCCIÓN La fosfolipasa A2 (PLA 2), principal componente del veneno de la serpiente Crotalus durissus terrificus (Cdt), se encuentra formando un complejo con la crotapotina (Ctp). Esta última actúa como chaperona acompañándola hasta el sitio de acción. Se ha reportado que la PLA 2 es menos neurotóxica si no está acompañada por Ctp. Dicho complejo, llamado crotoxina, representa aproximadamente el 50 % del peso seco del veneno (1-3). Se ha descripto el uso potencial de la PLA 2 como posible agente antiviral contra los virus del dengue y la fiebre amarilla (4,5). Actualmente, sólo existen métodos a escala de laboratorio para purificar PLA 2 y no a escala industrial debido a su alto costo. Los péptidos han demostrado ser ligandos de afinidad de gran utilidad para la purificación de numerosas moléculas porque pueden ser sintetizados a bajo costo y bajo normas GMP. Además, se pueden modificar fácilmente para aumentar su estabilidad química y resistencia a las proteasas presentes en el veneno de Cdt. En trabajos anteriores se identificaron a través del uso de bibliotecas combinatorias peptídicas secuencias que en principio parecían purificar PLA 2 pero que, luego, se demostró que se unían a la Ctp. Es por ello que se pensó en diseñar péptidos teniendo en cuenta los sitios de reconocimiento por su chaperona o por su sustrato enzimático (fosfolípidos). Se ha observado que Cdt presenta en su sangre inhibidores de la PLA 2 para evitar ser intoxicada por la proteína endógena que pudiera llegar a su sangre. El factor neutralizante crotálico (o CNF por sus siglas en inglés) es uno de los inhibidores presentes en la sangre de esta serpiente, que realiza su acción uniéndose a la PLA 2 y desplazando a la Ctp. La secuencia peptídica presente en CNF (P-CNF) que reconoce a PLA 2 está descripta en bibliografía (6,7). Por otro lado, se ha descripto la capacidad de un péptido extraído de la secuencia de la PLA 2 (residuos 70-74) de inhibir dicha enzima presente en el veneno de otra serpiente del mismo género (Crotalus durissus), por lo que fue seleccionado para evaluarlo en este trabajo (P-DWI) (8). Finalmente, se consideró el sitio de reconocimiento de PLA 2 por los fosfolípidos. Con eso en mente se diseñó un fosfopéptido (P-Lys) (9), que contenía una fosfoserina en su secuencia y a su vez se sintetizó la misma secuencia con una serina no fosforilada (P-Sol). Los péptidos así diseñados fueron sintetizados y evaluados como posibles ligandos de afinidad para purificar la PLA 2 partiendo de una mezcla compleja como es el veneno de Cdt.
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