Purificación del anticuerpo monoclonal Bevacizumab por cromatografía de afinidad con diferentes péptidos alternativos.

G. R. BARREDO; S. L. GIUDICESSI; M. C. MARTÍNEZ CERON; S. L. SAAVEDRA; G, MAHLER; L. FILGUEIRA RISSO; F. ALBERICIO; O. CASCONE; S. A. CAMPERI

Ciudad de Buenos Aires, Caballito

Congreso; ETIF 2018; 2018

Bevacizumab es un anticuerpo monoclonal (mAb) comercializado bajo el nombre de Avastin que inhibe al Factor de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGF) y se usa para tratar distintos tipos de cánceres. Actualmente, al igual que otros mAbs, su purificación implica un pasaje a través de una cromatografía de afinidad (AC) con Proteína A inmovilizada. Los altos costos de dicho ligando proteico motivan el desarrollo de métodos alternativos. Los péptidos cortos son menos costosos, de fácil síntesis y mayor estabilidad, resultando ideales como ligandos. El objetivo del presente trabajo es el diseño de ligandos peptídicos con afinidad por el Bevacizumab para su purificación por AC.MetodologíasSe sintetizó en fase sólida por el método dividir-acoplar-recombinar una biblioteca combinatoria peptídica, en la cual cada bolilla de resina HMBA-ChemMatrix presentó una única entidad peptídica. Se conjugó el Bevacizumab con Texas Red y se puso en contacto con la biblioteca. Se aislaron las bolillas fluorescentes y sus péptido se secuenciaron por espectrometría de masas (MS/MS). Los tres péptidos seleccionados se sintetizaron en mayor cantidad y se inmovilizaron en agarosa. Se ensayó la purificación de Bevacizumab con las matrices sintetizadas a partir del sobrenadante de cultivo de células CHO productoras. Las cromatografías se monitorearon midiendo la absorbancia en 280 nm. Se analizaron las fracciones colectadas por SDS-PAGE. ResultadosEl Bevacizumab puro se adsorbió a todas las matrices. Cuando se sembraron los sobrenadantes de cultivos de células CHO productoras, todas las proteínas del hospedador no fueron adsorbidas en la columna mientras que el Bevacizumab se adsorbió selectivamente y se recuperó en la fracción de elución. Al realizarse el análisis por SDS-PAGE de las fracciones de la cromatografía, el patrón observado en el eluído fue similar al del estándar de Bevacizumab comercial. ConclusionesLos péptidos hallados demostraron selectividad por Bevacizumab siendo todos candidatos para desarrollar métodos alternativos de purificación más económicos. Estos péptidos son el punto de partida para el desarrollo de ligandos, pudiéndose mejorar su afinidad y estabilidad con modificaciones químicas que serán ensayadas próximamente.