Purificación de biofármacos proteicos por cromatografía de afinidad con ligandos seleccionados por screening de bibliotecas peptídicas combinatorias

M. M. MARANI; M. OGGERO EBERHARDT; F. ALBERICIO; M. ETCHEVERRIGARAY; S.A. CAMPERI; O. CASCONE

Buenos Aires

Congreso; 4º Congreso y Exposición para la industria farmacéutica y afines. ETIF 2006; 2006

El alto costo de las proteínas recombinantes de interés farmacéutico restringe su uso masivo. Dado que le 80% del mismo es debido a los procesos de purificación, la cromatografía de afinidad con ligandos peptídicos inmovilizados se presenta como una alternativa adecuada a nivel industrial por su bajo costo. El desarrollo de bibliotecas peptídicas provee una técnica que permite ensayar miles de péptidos en forma empírica, lo que facilita el descubrimiento de ligandos adecuados para la purificación de cualquier proteína. Por el método de dividir-acoplar-recombinar (DAR), en nuestro laboratorio hemos desarrollado una biblioteca de 130.321 octapéptidos del tipo XXXXGGGG inmovilizados en la forma de una bolilla-un péptido. XXXX representa rodas las combinaciones posibles de los 20 aminoácidos comunes, dalvo cisterna. GGGG es un tetrapéptido de glicina que actúa como brazo espaciador. Como la proteína modelo se usó un anticuerpo monoclonal anti factor de crecimiento de colonias de macrófagos y granulocitos (mAb anti GM-CSF). Las bolillas que mostraron una reacción positiva fueron aisladas. Los péptidos unidos a las bolillas por el linker HMBA se liberaron con amoníaco gaseoso y se secuenciaron por electrospray-ionization MS/MS. La metodología desarrollada permite identificar ligandos peptídicos para su uso en la purificación de biofármacos proteicos por cromatografía de afinidad.