INVESTIGADORES
CAMPERI Silvia Andrea
congresos y reuniones científicas
Título:
Biosensor óptico de interferometría de biocapa para la selección de ligandos de afinidad por la rhEPO.
Autor/es:
M. C. MARTÍNEZ CERON; M. M. MARANI; M. ETCHEVERRIGARAY; M. TAULÉS; F. ALBERICIO; O. CASCONE; S. A. CAMPERI
Reunión:
Exposicin; 6° Congreso y exposición para la industria farmacéutica y afines (ETIF 2010).; 2010
Institución organizadora:
ETIF S:A.
Resumen:
La interferometría de biocapa (BLI) es aplicada en biosensores basados en fibra óptica (OCTET RED de FortéBio) y se utiliza para medir la interacción entre biomoléculas. Los péptidos cortos son ideales como ligandos de afinidad para su uso tanto en purificación como en métodos de diagnóstico. Se construyó una biblioteca combinatoria peptídica por el método Dividir-Acoplar-Recombinar que permite obtener todas las combinaciones posibles de aminoácidos en la forma ?una bolilla-un péptido?. La biblioteca fue de octapéptidos del tipo XXXOXXOO (O = posiciones fijas y X = posiciones variables, siendo X = Ala, Asp, Glu, Phe, His, Leu, Asn, Pro, Ser y Thr). Por medio de su screening se hallaron 60 péptidos con afinidad por la rhEPO. Se estudió la afinidad de los péptidos seleccionados por la rhEPO por medio de un biosensor BLI (OCTET RED de FortéBio). Para ello se marcó la rhEPO con biotina y se la inmovilizó en sensores Super estreptavidina (SSA). El buffer de ensayo fue buffer de fosfatos 20 mM pH 7,0, Tween 20 0,05%. Se utilizó como sensor de referencia el SSA con biocitina inmovilizada. Los péptidos que mostraron mayor afinidad fueron seleccionados como ligandos para ser inmovilizados en matrices de agarosa y posteriormente se ensayó la adsorción de rhEPO a las matrices cromatográficas. Todas las matrices agarosa-péptido mostraron afinidad por la rhEPO. También se evaluó la afinidad de las matrices agarosa-péptido por la seroalbúmina bovina, principal proteína presente en el sobrenadante de cultivo. Aquellos péptidos con mayor selectividad fueron seleccionados para futuros desarrollos en métodos de purificación de rhEPO.
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