AISLAMIENTO, SECUENCIACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DEL PEPTIDOMA DE LAS SECRECIONES DE LA PIEL DE DOS ESPECIES DE HYPSIBOAS (ANURA, HYLIDAE, HYLINAE)

A. E. BRUNETTI; M. M. MARANI; R, H, GONZÁLEZ; S.A. CAMPERI; J. FAIVOVICH; G. M. CABRERA

Los Cocos, Córdoba

Congreso; I Congreso Argentino de Espectrometría de masa; 2012

Sociedad Argentina de Espectrometría de masa

Las secreciones producidas por las glándulas serosas de la piel de anfibios contienen péptidos con un amplio espectro de actividad antibacterial y antifúngica. Éstos constituyen la primera barrera del sistema de inmunidad innata que defiende al animal contra la invasión de microorganismos patógenos y pueden actuar como una forma de protección frente a sus predadores. Estas moléculas presentan un gran potencial para el desarrollo de agentes antimicrobianos de uso terapéutico contra microorganismos resistentes. Su estudio es también de interés para el conocimiento de la biología de las especies que los sintetizan, la evolución del sistema inmune en anuros, y en algunos casos, como fuente de información con valor taxonómico para ayudar a comprender la historia evolutiva de las diferentes familias de ranas. El objetivo del presente trabajo fue el aislamiento, identificación y secuenciación de los péptidos presentes en las secreciones de la piel de dos especies del género Hypsiboas y la posterior síntesis química y caracterización de su actividad antimicrobiana. Se colectaron individuos adultos de ambos sexos de Hypsiboas pulchellus e H. punctatus durante el verano de los años 2010, 2011 y 2012 en las localidades de Ibicuy (Entre Ríos) y Santa Fe (Santa Fe) Argentina, respectivamente. Las secreciones fueron obtenidas mediante estimulación eléctrica transcutánea(1). El extracto crudo fue separado y analizado mediante HPLC-EM utilizando dos tipos de columna: C18 o PFP, e ionizado mediante ESI. La secuencias de novo se obtuvieron por interpretación manual de los espectros MS/MS generados mediante un analizador hibrido cuadrupolo-tiempo de vuelo, MicrOTOF Q II de Bruker. Algunos péptidos fueron sintetizados en fase sólida empleando la química Fmoc, y sus espectros EM/EM fueron comparados con los de los compuestos naturales. La actividad antimicrobiana fue evaluada frente a Escherichia coli ATCC 25922 y Staphylococcus aureus ATCC 29213. Se identificaron y secuenciaron 18 péptidos de cadena corta (6-14 residuos) en H. pulchellus y 13 en H. punctatus, con el extremo C terminal en forma de ácido o en forma de amida. No se encontraron diferencias entre sexos en cuanto a la composición peptídica de ambas especies, pero sí en cuanto a la intensidad de algunos de ellos en H. pulchellus. Al comparar entre años, se evidenció variación en la presencia/ausencia de tres péptidos de H. pulchellus y de uno solo en H. punctatus.