INVESTIGADORES
CAMPERI Silvia Andrea
congresos y reuniones científicas
Título:
Métodos alternativos para la síntesis de bibliotecas combinatorias de peptidomiméticos estables frente a proteasas
Autor/es:
SILVANA L. GIUDICESSI; MARÍA C. MARTÍNEZ CERON; FERNANDO ALBERICIO; OSVALDO CASCONE; SILVIA A. CAMPERI
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; 7º Congreso y Exposición para producción farmacéutica, biotecnológica y veterinaria.; 2012
Institución organizadora:
ETIF SA
Resumen:
La cromatografía de afinidad con ligandos peptídicos inmovilizados es ideal para la purificación de proteínas en mezclas complejas. Los ligandos peptídicos son ideales por su bajo costo, fácil síntesis y adecuada afinidad. El desarrollo de bibliotecas combinatorias peptídicas provee una técnica que permite ensayar decenas de millones de péptidos en forma empírica, lo que facilita el descubrimiento de ligandos adecuados para la purificación de la proteína de interés. Sin embargo, la presencia de proteasas en las muestras crudas donde se encuentra la proteína de interés puede disminuir la vida útil de la matriz cromatográfica. En este trabajo se diseñó una estrategia de síntesis de bibliotecas de peptidomiméticos con el fin de producir ligandos resistentes a dichas enzimas Los peptidomiméticos se sintetizaron en fase sólida empleando la química Fmoc en resina Rink-Amide-MBHA y los N--Fmoc-aminoácidos con los grupos laterales protegidos. Para la síntesis de peptidomiméticos se reemplazó las uniones amida más susceptibles a proteasas por uniones amina. La primera unión amida entre los primeros dos aminoácidos por una unión amina. Para ello se incorporó en lugar del Fmoc-aminoácido el Fmoc-aminoaldehído correspondiente por amidación reductiva comparando dos estrategias: a) 5 eq de Fmoc-aminoaldehído en trimetilortoformato y posterior tratamiento con 5 eq de triacetoxiborohidruro de sodio en diclorometano (DCM), b) 5 eq de Fmoc-aminoaldehído en solución de ácido acético 0,1% en DMF y posterior tratamiento con triacetoxiborohidruro en DMF:metanol (1:1). El Fmoc-aminoaldehído se sintetizó por oxidación del Fmoc-aminoalcohol comercial por medio de dos métodos: a) utilizando la resina comercial ácido 2-iodobenzoico-poliestireno (IBX-PS) que permite realizar la oxidación en fase sólida facilitando la purificación del aldehído resultante, y b) por oxidación con el reactivo de Dess-Martin periodinano (DMP). Los péptidomiméticos sintetizados se analizaron por HPLC, ESI-MS y MALDI-MS/MS. La reacción utilizando la resina IBX-PS resultó menos eficiente, no pudiéndose superar el 60% de rendimiento. Por otro lado, el DMP permitió la oxidación del alcohol en un 100%. La incorporación del Fmoc-aminoaldehído través de amidación reductiva fue más eficiente cuando se utilizó trimetilortoformato y posterior tratamiento con triacetoxiborohidruro de sodio en DCM. Las estrategias de síntesis de peptidomiméticos desarrolladas permiten el diseño de ligandos adecuados para la purificación de proteínas en mezclas complejas en presencia de proteasas.
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