INVESTIGADORES
CAMPERI Silvia Andrea
congresos y reuniones científicas
Título:
Purificación industrial de proteínas de interés comercial. Pectinasas
Autor/es:
SILVIA A. CAMPERI; OSVALDO CASCONE
Lugar:
Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Jornada; VII Jornadas interdisciplinarias de becarios de investigación. UBACyT; 1993
Resumen:
Hemos demostrado la posibilidad de separar la pectinliasa (PL) de la pectinesterasa (PE) de una preparación comercial por cromatografía de afinidad con Cu(II) inmovilizado para utilizar ambas enzimas en forma más racional, y el uso de la fracción que contiene PL para clarificar  jugo de manzana sin producción simultánea de metanol. A los fines tecnológicos es necesario optimizar dicho fraccionamiento estudiando la influencia de las variables críticas de este tipo de cromatografía: pH, fuerza iónica y catión inmovilizado, que redundan en el costo y calidad del producto obtenido. Se ensayaron 4 cationes: Cu, Zn, Ni y Co, en ausencia y presencia de 100-250-500 y 1000 mM de NaCl, y a pHs 8,0 para el proceso de adsorción y 4,5 y 3,0 para el de elusión. La PL no interaccionó con la matriz cromatográfica en ningún caso, mientras que la PE mostró un comportamiento dependiente de la fuerza iónica. Aunque este compotamiento es cualitativamente similar para los 4 cationes ensayados, se observan diferencias cuantitativas importantes que hacen al Cu el catión de elección para un procesos tecnológico. Se determinaros los parámetros importantes para el scale-up del proceso: capacidad dinámica (columna), cinética de adsorción e isotermas de adsorción en el equilibrio (Batch). El primer parámetro se determinó a partir de las curvas de breakthrough, resultando 2,21 x 106 U/ml a un flujo lineal máximo de 0,82 cm/min. Los resultados de la cinética de adsorción indican que ya a los dos minutos la adsorción de PE es completa, tanto a 20 ºC como a 30 ºC. La capacidad máxima -determinada  a partir de las isotermas de adsorción en el equilibrio fue de 445 mU/ml a 20 ºC y 309 mU/ml a 30 ºC y las Kd de 4,68 mU/ml a 20 ºC y 1,55 mU/ml a 30ºC.
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