DESARROLLO DE MÉTODOS ALTERNATIVOS DE PURIFICACIÓN DE TOXOIDE DIFTÉRICO PARA ATENUAR LAS REACCIONES ADVERSAS A LA VACUNA ANTIDIFTÉRICA

MARÍA C. MARTÍNEZ CERON; SILVANA L. GIUDICESSI; CHRISTIAN DOKMETJIAN; SILVIA A. CAMPERI; OSVALDO CASCONE

Buenos Aires

Congreso; 7º Congreso y Exposición para producción farmacéutica, biotecnológica y veterinaria.; 2012

ETIF SA

La difteria es una enfermedad causada por la toxina (DT) secretada por Corynebacterium diphtheriae. El toxoide (DTx) utilizado para la preparación de vacunas diftérica se obtiene por inactivación con formaldehído de la DT producida en cultivos de C. diphtheriae. Generalmente para la preparación de vacunas se emplea el DTx parcialmente purificado. Las reacciones colaterales producidas por la vacunación están directamente relacionadas con la presencia de contaminantes en las vacunas. El aumento del grado de pureza de la DTx disminuiría las reacciones adversas producidas por la vacunación y permitiría el aumento de las dosis mejorando el sistema de inmunización. Los procesos de afinidad se basan en un reconocimiento molecular entre la proteína de interés y un ligando inmovilizado y permiten purificar la proteína de interés presente en una mezcla compleja en un solo paso. Los colorantes reactivos biomiméticos son ideales para separaciones industriales por afinidad pues son comercialmente accesibles a bajo costo, son fáciles de inmovilizar en matrices cromatográficas y tienen alta resistencia química. Se preparó una biblioteca de matrices cromatográficas con colorantes inmovilizados. Se mezclaron alícuotas de 1 mL de Sepharose con 50 mg de cada colorante reactivo a evaluar disuelto en 2 mL de agua. Se adicionó a cada mezcla reactiva 1 mL de NaCI 2 N. Luego, se agregaron 0,5 mL de NaOH 0,1 N y se dejó agitando a temperatura ambiente durante 72 h. Las resinas se lavaron con agua, NaCl 1 M y (NH4)2SO4 2 M y nuevamente con agua. Los colorantes ensayados fueron: Reactive Black 5, Reactive Brown 10, Rojo Vilmafix 7B-HE, Reactive Yellow 2, Reactive Blue 5, Reactive Yellow 86, Reactive Blue 4, Remazol Brilliant Violet 5R, Reactive Blue 15, Escarlata Vilmafix G-A, Rojo F5B (Reactive Red 2), Amarillo FR, Reactive Red 4, Naranja R-HE, Azul R-HE, Amarillo 4R-H, Reactive Green 19, Rojo Vilmafix 3B-HE (Red-120) y Cibacron Blue 3GA. Del screening surgieron 3 colorantes adecuados que adsorbieron la DTx en un 100%: Reactive Blue 15, Naranja R-HE y Cibacron Blue 3GA. Dado estos resultados preliminares se deberá analizar diferentes condiciones para establecer la más adecuada para encarar un proceso cromatográfico con éxito para la purificación de DTx a escala industrial.