INVESTIGADORES
CAMPERI Silvia Andrea
artículos
Título:
Purificación industrial de enzimas de interés comercial. Pectinasas
Autor/es:
SILVIA A. CAMPERI
Revista:
Industria y Química
Editorial:
ASOCIACIÓN QUÍMICA ARGENTINA
Referencias:
Lugar: Buenos Aires; Año: 2000 vol. 341 p. 28 - 28
ISSN:
0368-0819
Resumen:
Los preparados comerciales de pectinasas, consisten en uno mezcla de enzimas con diversas actividades sobre las pectinas. La pectinliasa (PL) depolimeriza por transeliminación la pectina esterificada. La pectinesterasa (PE) actúa en combinación con la poligalacturonasa(PG): la PE, hidroliza el éster metílico de las pectinas produciendo metanol y pectinas de bajo contenido en éster que son posteriormente depolimerizadas por lo acción de lo PG. El metanol liberado queda así incorporado en el jugo, lo cual constituye un peligro potencial en jugos no sometidos posteriormente o un proceso de concentración y altera el contenido en ésteres volátiles responsables del flavor característico de cado fruto. Para una utilización más racional de las actividades enzimáticas contenidas en los preparados comerciales es conveniente su fraccionamiento. Lo PL aislada permite lo clarificación de jugos de fruto sin producción de metanol. Por otro lado la PE puede utilizarse en lo preparación de pectinas de bajo grado de metoxilación. En esta tesis se estudió el fraccionamiento de pectinasas por cromatografía de afinidad con colorantes triazínicos e iones metálicos inmovilizados sobre geles blandos, sobre membranas y en sistemas de partición en dos fases acuosas por afinidad. Se ensayó el fraccionamiento de pectinasas con nueve colorantes triazínicos, de los cuales sólo dos mostraron un comportamiento adecuado. Tanto el Azul R-HE como el Amarillo R-HE retuvieron totalmente lo PL y no lo PE. Sin embargo, este sistema sólo resultó útil a escala de laboratorio. Por otro lado, la cromatografía de afinidad con iones inmovilizados IMAC dividió el pool enzimático en dos fracciones, una con el total de lo PL y parte de Ia PG, que no se adsorbió o la matriz cromatográfica y otra fracción que sí lo hizo, con el total de lo PE y el resto de lo PG. Lo capacidad dinámica del sistema para la adsorción de PE fue 2610 U de PE/ml de matriz cromatográfica y la productividad del proceso 52 U de PE/ml de matriz cromatográfica/minuto. Posteriormente se estudió el fraccionamiento de pectinasas por partición en dos fases acuosos por afinidad con iones cúpricos inmovilizados (lMAP) Sin embargo, los resultados obtenidos por IMAC en columnas no se reprodujeron en lMAP. EI Cu(ll)lDA inmovilizado en membranas de fibra hueca injertadas con poli-GMA presentó un comportamiento similar a la Sepharose quelonte-Cu2+ ya que fue capaz de adsorber lo PE pero no lo PL, permitiendo así el fraccionamiento de preparados comerciales de Pectinasas. El sistema de membranas presentó uno capacidad para lo adsorción de PE de 7500 U/ml, superior o la obtenida con Sepharose quelante. Asimismo, la alta resistencia mecánica de las membranas, así como su buena transferencia de masa, permitió aumentar el flujo de trabajo, Todo ello generó un aumento de lo productividad a 740 U de PE/ml de matriz cromotogáfica/minuto, lo que redujo el costo de producción principalmente por disminución del costo de mano de obra. El costo estimado para procesar 10 kg de preparado comercial de pectinasas utilizando Sepharose quelante fue de 129 U$S, frente a 45 U$S para el sistema basado en membranas. El sistema de membranas diseñado para el fraccionamiento de pectinasas es aplicable en el ámbito industrial debido o su bajo costo, fácil escalado, posibilidad de procesamiento de muestras crudos, alta capacidad y velocidad, pudiendo extenderse al fraccionamiento de otras mezclas proteicos de interés industrial
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