Desarrollo de un método cromatográfico para la determinación multiresiduo de anticoccidianos

JESICA SOSA; CARLOS E. BOSCHETTI; GASTÓN KNOBEL

Córdoba

Congreso; VI Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de los Alimentos; 2016

La utilizaciónde nuevos y diversos medicamentos veterinarios, ha ampliado la gama de residuosa analizar para garantizar la seguridad e inocuidad de los alimentos de origenanimal. Particularmente en la actividad avícola, uno de los medicamentos másutilizados son los anticoccidianos. Éstos se utilizan para prevenir y tratar lacoccidiosis, enfermedad intestinal muy común que afecta a las aves de corral entodo el mundo, la cual es causada por distintas especies de parásitosprotozoarios del género Eimeria. Comoconsecuencia de su uso habitual y de la variedad de drogas existentes, lasactuales legislaciones tanto a nivel nacional como internacional, imponen uncontrol estricto de los mismos, volviéndose fundamental el desarrollo de nuevosmétodos para su determinación. De esta forma, se busca lograr una correctaseparación e identificación de distintos anticoccidianos utilizandocromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) con detector ultravioleta conarreglo de diodos (DAD). Para la determinación de los parámetros instrumentalesse utilizaron patrones de Amprolium HCl, Clopidol, Decoquinato, Etopabato, HalofuginonaHBr, Robenidona HCl, Roxarsona y Toltrazuril, preparando para cada uno de éstossoluciones de 500 ppb, 500 y 600 ppm además de distintas dilucionesintermedias. A partir de la búsqueda bibliográfica se decidió trabajar a 254 y278 nm, utilizando como fases móviles distintos sistemas compuestos por aguaMilli Q acidificada con 1% de ácido acético y como modificadores orgánicosmetanol y acetonitrilo. Se desarrollaron diversos métodos, cuyas modificacionesimplicaban el cambio de proporciones agua/modificador orgánico, pH, el trabajoen condiciones isocráticas o gradiente, temperatura de la columna así comotambién el uso de dos columnas distintas: una C18 de 250 mm x 4,6 mm de 5 µm dediámetro interno y una monolítica de fase reversa de 50 mm de longitud y 4,6 mm de diámetro interno. Del análisis de los métodos mencionados, solo fueposible la separación e identificación de tres compuestos anticoccidianos(Clopidol, Etopabato y Toltrazuril), en un tiempo menor a 13 minutos), medianteel empleo de la columna monolítica y un gradiente de solventes conformados poragua Milli Q acidificada con ácido acético 1%, pH 3 y acetonitrilo comomodificador orgánico, trabajando a temperatura ambiente. En cuanto a losparámetros analíticos se determinaron los límites de detección (LOD) ycuantificación (LOQ) siendo: 0,09 ppm y 0,29 ppm para Clopidol; 0,009 ppm y0,03 ppm para Etopabato; 0,74 ppm y 2,47 ppm para Toltrazuril, respectivamente.Estos límites son adecuados para la determinación de los analitos en muestrasde hígado aviar según requerimientos de Senasa (REF). Se verificó que el rangode linealidad del método abarca las concentraciones en estudio hasta 10 ppm entodos los casos. En etapas posteriores se aplicará este método cromatográficopara el análisis de muestras de tejido de origen aviar. Dicho análisis incluiráextracciones de tipo QuEChERS, para minimizar los posibles interferentesgracias a su etapa de limpieza, así como un paso de pre-concentración.