Determinación de antibióticos polipeptídicos en tejido animal por UHPLC-DAD

FEDERICO AZCÁRATE,; CARLOS EUGENIO BOSCHETTI

Santa Fe

Congreso; VI Congreso Argentino de Química Analítica; 2011

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

En la fabricación de alimento balanceado para cría de animales se suelen agregar diferentes agentes como promotores de crecimiento, ejemplo de este tipo de compuestos son Bacitracina (BAC) y Virginiamicina (VIR), dos antibióticos polipeptídicos de origen microbiano. Las entidades reguladoras establecen límites para residuos de estos antibióticos en el tejido de animales al momento de su faena; en Argentina SENASA indica un máximo permitido de 500 ug/Kg  para BAC y de 100 ug/Kg para VIR [1-3]. En este trabajo se presentan los avances realizados en el desarrollo de un método cromatográfico para confirmar y cuantificar presencia de estos residuos en hígado bovino.Extracción y preconcentración de las muestras: Para estudiar el solvente de extracción se trabajó con muestras de tejido fortificadas con ambos analitos, los solventes evaluados fueron metanol, acetonitrilo, acetato de etilo, ácido clorhídrico 0.1 M y mezclas de metanol- agua y metanol-ácido clorhídrico 0.1 M. Una vez seleccionado el solvente de extracción se evaluó la forma de concentrar y limpiar dicho extracto mediante extracción en fase sólida (SPE), utilizando cartuchos Oasis HLB y C18. Para esto, previo a la siembra se evaporó el solvente de extracción y se retomó en buffer fosfato a pH 8. La elución se realizó con acetonitrilo.Análisis cromatográfico: La determinación se realizó con un cromatógrafo líquido de ultra alta eficiencia Waters Aquity con detector de arreglo de diodos a 254 nm. La separación se efectuó con una columna Thermo de 50 x 3 x 1.9 (tengo que chequearlo) usando como fase móvil un gradiente de buffer fosfato pH 3 y acetonitrilo.Discusión: El mejor resultado, en términos de % de recuperación, se logró con la mezcla metanol-ácido clorhídrico 0.1 M como solvente de extracción. Respecto al paso de concentración por SPE los resultados fueron diferentes dependiendo del analito; para BAC la mejor recuperación se alcanzó a pH 8 empleando columnas Oasis HLB, mientras que para VIR se consiguieron buenas recuperaciones con ambos cartuchos a los diferentes pH estudiados (3, 4.8 y  8). Las recuperaciones finales alcanzadas fueron 40% para BAC y 60% para VIR. La metodología lograda es aplicable solamente para VIR, debido a que para BAC no se alcanza la recuperación indicada por SENASA, que establece un rango de 60-110% para estos métodos. Se proponen alternativas en la preconcentración para mejorar estos resultados.