Informe técnico de Avance no. 1 - Uso del Eje CXCR4/SD-1 y del anclaje a colageno tipo I para el redireccionamiento de MSCs

MARCELA F. BOLONTRADE

2009-09-01/2009-12-01

1-9

Informe técnico de avance de Instrumento de Agencia PICT

Prom.Gral.del Conoc.-Cs.Medicas

El objetivo del presente proyecto es aumentar la capacidad de reclutamiento las células madre mesenquimales humanas (hMSCs) hacia el tejido blanco (tumor), de modo de utilizar las MSCs como agentes terapéuticos de acción en el ambiente tumoral. De este modo, MSCs cargadas con  adenovirus oncolíticos (CRAD) deben llegar hasta el tumor y una vez en este microambiente los CRADs deben replicarse llevando a cabo la eliminación del tumor. Para lograr este objetivo hemos utilizado el CRAD Ad-F512-E1A. F512 es la región mínima funcional del promotor de SPARC que replica selectivamante dentro de un tumor SPARC positivo (Lopez y col, PlosONE 2009). En estudios iniciales observamos que las MSCs pueden ser infectadas de modo eficiente por Adenovirus que poseen una fibra quimera 5/3 (p=0.01). Mediante el uso de luciferasa como gen reportero observamos que el promotor F512 presenta una actividad mayor en líneas celulares tumorales en comparación con las MSCs (p=0.001, MOI 100 y 1000; NS MOI 10). Esto representa una ventaja fisiológica ya que la cantidad de CRAd necesario para eliminar células malignas seria bastante menor que el necesario para inducir la muerte a las MSCs. Esto brinda un margen terapéutico importante entre el “blanco tumoral” y el “vehiculo-MSC” en términos de su sensibilidad a la carga del virus. Experimentos iniciales mostraron que MOIs de 10 a 1000 del CRAd Ad-F512-E1A no matan a las MSCs, mientras que a MOI de entre 100 y 1000 el CRAd elimina a las células tumorales mueren (p=0.001). Es interesante destacar que no se observó muerte de las MSCs, incluso a una MOI de 2500. Más aun, el medio condicionado por células tumorales favoreció la supervivencia de las MSCs. Se determino asimismo que las MSCs cargadas con virus no pierden su capacidad de diferenciarse a los linajes osteogénico, adipogénico y condrogénico.