Mecanismos involucrados en la acción antiproliferativa de un péptido cíclico del Interferón-alfa2b

BLANK VIVIANA C; PEÑA CLARA; ROGUIN LEONOR P

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica, LIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2006

Previamente diseñamos y caracterizamos la actividad antiproliferativa de un péptido quimérico cíclico (PQC) que simula la región del interferón-a2b (IFN-a2b) que se une a sus receptores. El propósito de este trabajo fue determinar si la inhibición del crecimiento se relaciona con un arresto del ciclo celular o con la inducción de apoptosis. Luego de incubar células WISH por 72 horas con IFN-a2b o PQC, comprobamos que la citoquina incrementó el porcentaje de células en fase S, mientras que el péptido no modificó el ciclo celular. En las mismas condiciones experimentales, observamos un aumento en la población de células hipodiploides (19% control, 36% IFN-a2b, 61% PQC). Cuando se midió la externalización de fosfatidilserina en la membrana plasmática se obtuvo un incremento del porcentaje de células en apoptosis temprana luego de 24 hs de incubación (14% control, 7% IFN-a2b, 23% PQC) y tardía luego de 48 hs (9% control, 22% IFN-a2b, 73% PQC). Para investigar los mecanismos moleculares involucrados en la apoptosis, se evaluó la actividad de caspazas (método fluorométrico) y la expresión de proteínas de la familia Bcl-2 (Western blot). Cuando las células WISH se incubaron durante 72 hs con IFN-a2b o PQC se activaron tanto la caspasa 3 (190% ± 20%, IFN-a2b y 150 % ± 10%, PQC) como la caspasa 8 (150% ± 10%, IFN-a2b y 160% ± 10%, PQC) y la caspasa 9 (160% ± 30%, IFN-a2b y 170 % ± 30%, PQC). Además, se observó un aumento en la expresión de la proteína Bax y una disminución de Bcl-2, sin cambios significativos en los niveles de Bcl-XL.  En su conjunto, los resultados indicaron que en la respuesta apoptótica inducida por el péptido cíclico participan los receptores de muerte celular y la vía mitocondrial. Asimismo el IFN-a2b activa las mismas vías de apoptosis, aunque su efecto sobre la fase S del ciclo celular sugiere que existen diferencias en algunas de las señales intracelulares inducidas por el péptido quimérico y la citoquina.