Eficacia antitumoral y mecanismo de acción de un derivado de penicilina en células de melanoma con diferente sensibilidad a inhibidores de BRAF

SOFIA BAJICOFF; ELIZABETH BARRIONUEVO; PATRICIA G. CORNIER; CARINA M. DELPICCOLO; ERNESTO G. MATA; VIVIANA BLANK; LEONOR ROGUIN

Buenos Aires

Congreso; XXXV Jornadas Multidisciplinarias de Oncología; 2022

Instituto Angel Roffo

Introducción y antecedentesPreviamente demostramos que el TAP7f, un derivado sintético formado por un anillo penicilánico unido al dipéptido Leu-Phe a través de un grupo triazol, se comporta como un agente antitumoral con potencial antimetastásico que inhibe la expresión de ß-catenina y algunas proteínas blanco como ciclina D1, c-myc, MMP-2 y MMP-9. Puesto que ha sido reportado que la vía Wnt/ß-catenina podría estar involucrada en los mecanismos de resistencia a inhibidores de BRAF (BRAFi), la posibilidad de bloquear esta vía podría ser considerada una estrategia para mejorar la respuesta de células resistentes al tratamiento.ObjetivosEn este trabajo, examinamos el efecto del TAP7f sobre la vía Wnt/ß-catenina en células de melanoma sensibles (A375) y más moderamente resistentes (SB2) a inhibidores de BRAF.Materiales y MétodosSe emplearon las líneas de células de melanoma humano A375 (BRAFV600F) y SB2 (NRASQ61K). El TAP7f fue obtenido por síntesis química. Los valores de IC50 del TAP7f, dabrafenib y trametinib se obtuvieron a partir de curvas concentración-respuesta luego de 72h de incubación, empleando el método colorimétrico de la hexosaminidasa. Los niveles de expresión de ß-catenina y P-ß-catenina (Ser33/37) fueron evaluados por ensayos de Western blot.ResultadosCuando se determinó la potencia citotóxica del TAP7f, se obtuvieron valores de IC50 de 10.0 ± 1 µM y 9.0 ± 3 µM en las células A375 y SB2, respectivamente (n=3). Además, los valores de IC50 para Dabrafenib (D, BRAFi) y Trametinib (T, MEKi) fueron 7.7 ± 0.5 nM y 2.1 ± 0.9 nM en las células A375, mientras que las células SB2 fueron más resistentes a ambos inhibidores (IC50 D: > 30 µM; IC50 T: > 20 nM). Luego de 24h de incubación, se observó que el TAP7f (20 µM) redujo los niveles de expresión de ß-catenina 67.5 ± 0.6 % y 59.1 ± 0.1 % en las células A375 y SB2, respectivamente. Asimismo, el compuesto incrementó, en ambas líneas celulares, los niveles de fosforilación de ß-catenina en los residuos de Ser 33/37, pertenecientes a la región N-terminal involucrada en la degradación de ß-catenina. Cuando las células A375 y SB2 fueron incubadas con el TAP7f en presencia de MG132, un inhibidor del proteasoma, el efecto inhibitorio del TAP7f sobre los niveles de expresión de ß-catenina fue significativamente revertido.ConclusionesNuestros resultados sugieren que el TAP7f disminuye los niveles de expresión de ß-catenina promoviendo su degradación vía proteasoma en líneas de melanoma con diferente perfil genético y sensibilidad a BRAFi. Este efecto nos alienta a continuar estudiando el mecanismo de acción del TAP7f como un agente promisorio para el tratamiento de células resistentes a inhibidores de BRAF.