Modulacion a largo plazo de la actividad y expresion de tirosina hidroxilasa (TH) por endotelinas 1 y 3 en el bulbo olfatorio (BO) de rata

SABRINA NABHEN; AGUSTINA BATISTONE; JULIA GUIL; LILIANA G. BIANCIOTTI; MARCELO S. VATTA

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; Reunión Anual SAIC 2009; 2009

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

Los bulbos olfatorios (BOs) se relacionan con áreas del SNC que regulan la función cardiovascular (NTS, sistema límbico e hipotálamo) y expresan la enzima Tirosina Hidroxilasa (TH) que está regulada a corto y a largo plazo por complejos mecanismos. Las Endotelinas (ETs) y sus receptores también se encuentran en esta región del SNC, sugiriendo su posible participación en la regulación en dicha función biológica. El objetivo del presente trabajo es estudiar los efectos de las ETs a largo plazo sobre la actividad y expresión de la TH y los mecanismos intracelulares involucrados. Los BOs se incubaron durante 240 min en ausencia o presencia de ETs, de los antagonistas de los receptores de ETs (ETA y ETB) y de inhibidores de vías intracelulares. Se determinó la actividad de TH por método radioenzimático y los niveles de proteína TH total y de los sitios fosforilados por Western Blot. Los resultados se expresan como % vs control (ANOVA y test de Student-Newman-Keuls, p<0.05; n: 5-8). Los resultados muestran que ET-1 y ET-3 10 pM, incrementan la actividad de TH (44% y 52% vs. control, respectivamente), en presencia de BQ-610 (antagonista del receptor ETA), la respuesta a ambas ETs disminuyó (ET1+BQ-610:53% y ET3+BQ-610:65% vs. ET-1 y ET-3, respectivamente). En presencia de antagonista de las vías intracelulares: PKA, CAMK-II y PKC, la actividad de la TH decreció vs. ET-1 y ET-3: H-89 500nM (ET1:39% y ET3:54%), KN-62 1 uM (ET1:64% y ET3:72%), GF-109203x 100 nM (ET3:36%). Ambas ETs aumentaron los niveles de proteína TH total (ET1:154% y ET3:104% vs. control), pSer19(ET1:42% y ET3:54% vs. control), pSer31(ET1:44% y ET3:33% vs. control) y pSer40(ET1: 80% y ET3: 85% vs. control). Estos resultados nos permitieron concluir que las ETs incrementan la actividad de TH a través del receptor ETA, activando la vía de la PKA, CAMK-II y PKC (sólo en el caso de la ET-3) mediante un aumento de los niveles de proteína TH total y de sus formas fosforiladas: pSer19, pSer31 y pSer40.