Regulación de los niveles de AMPc en células tumorales pancreáticas AR42J. Rol de las proteínas de resistencia a multidrogas (MRPs).

FEDERICO DIEZ; MYRIAN R. RODRIGUEZ; CORINA GARCIA; SABRINA COPSEL; CARINA SHAYO; LILIANA G. BIANCIOTTI; CARLOS A. DAVIO

Mar del Plata

Congreso; Reunión Anual SAIC-SAFIS- SAFE 2010.; 2010

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

La señalización vía AMPc controla procesos celulares tales como proliferación, diferenciación y apoptosis, en células normales y tumorales. La regulación de los niveles intracelulares de AMPc (AMPci) esta mediada por su degradación a través de fosfodiesterasas, desensibilización de GPCRs y recientemente se asocio también a su exclusión por medio de MRPs. En este trabajo estudiamos dicha regulación en células AR42J frente a agentes capaces de modular el AMPc. Sus niveles se evaluaron a través de un ensayo de competición de [3H]AMPc por PKA. Sorprendentemente, Amtamina (agonista H2) y prostglandina E2 de manera tiempo y concentración dependiente, disminuyen el AMPci (65% vs basal en ambos casos), mientras que en acinos pancreáticos normales inducen un incremento del mismo. Por otra parte, Forskolina y Secretina producen un incremento del AMPci alcanzando un máximo a los 5 minutos y permaneciendo elevado por encima del nivel basal por el resto del ensayo (1h). La acumulación de AMPc extracelular (AMPce) aumenta alcanzando su máximo nivel a la hora de estimulo. El tratamiento con Probenecid (inhibidor de MRPs) inhibió dicha exclusión (35 y 85% respectivamente) y al mismo tiempo causó un mayor incremento del AMPci (20 y 59% respectivamente). El patrón cinético no se modificó en presencia de MIX (inhibidor de fosfodiesterasas). Por PCR en tiempo real se detectó la expresión de MRP4, MRP5 y MRP8, y por western blot la expresión MRP4. Estos resultados indican que los MRPs regulan los incrementos de AMPc en células AR42J favoreciendo su salida, sugiriendo que la extrusión a través de dichos transportadores puede ser un mecanismo adicional en la regulación de los niveles de AMPc en este sistema, más aún la alteración en la respuesta a ligandos clásicos asociados a incrementos intracelulares de AMPc sugieren que el metabolismo de dicho nucleótido se encuentra alterado en células tumorales respecto de acinos pancreáticos normales.