Caracterización funcional de aislamientos clínicos argentinos de Bordetella pertussismediante estrategias inmuno-proteómicas en comparación con cepas vacunales en uso.

GAILLARD ME,; BOTTERO D.; FRITZ, M.; CASTUMA C.; GRAIEB A.; FINGERMANN M.; HOZBOR D.

Buenos Aires,

Congreso; XII CONGRESO ARGENTINO DE MICROBIOLOGÍA, AAM.; 2010

Asociacion argentina de Microbiologia

Antecedentes: La tos convulsa o pertussis es una enfermedad respiratoria aguda, altamente contagiosa, causada por Bordetella pertussis. Esta enfermedad inmunoprevenible ha sido fuertemente controlada a partir de la implementación de planes de inmunización masiva en los años cincuenta. Sin embargo, en los últimos 20 años se ha detectado un resurgimiento sostenido de la misma aún en poblaciones altamente inmunizadas. Hoy pertussis constituye la quinta causa de muerte infantil causada por una enfermedad inmunoprevenible. Para explicar esta resurgencia se han propuesto diferentes causas, entre otras: mejoras en la vigilancia y metodología diagnóstica, pérdida de la inmunidad inducida por las vacunas y disminución de la eficacia de la vacuna debido a una variación antigénica del agente causal. Respecto de esta última, se ha demostrado en distintos países la circulación de bacterias que divergen a nivel genómico de las cepas vacunales en uso. El conocimiento del impacto funcional de dicha divergencia, sin embargo aún es escaso. Objetivos: Evaluar la relevancia funcional de la divergencia antigénica a través del análisis de expresión diferencial de proteínas mediante el empleo de estrategias del tipo proteómica comparativa e inmunoblots Materiales y métodos: Para la evaluación de la expresión diferencial de proteínas entre la cepa vacunal Tohama y un aislamiento circulante representativo de la población bacteriana circulante, se empleó la técnica de electroforesis 2D acoplada a Espectrometría de Masa del tipo Maldi Tof. En base a los datos obtenidos de la aplicación de esta metodología se realizaron inmunoblots empleando antisueros obtenidos de las proteínas diferenciales identificadas. En particular, se empleó el antisuero anti una proteína efectora del sistema de secreción tipo III (TTSS), Bsp22. Las determinaciones se realizaron sobre proteínas extracelulares, obtenidas de sobrenadantes de cultivos líquidos de 16 aislamientos clínicos de nuestra colección obtenidos durante el período 1969-2008. Se realizaron ensayos comparativos con las cepas vacunales. Resultados: En los estudios protéomicos comparativos se detectó la expresión diferencial de 13 proteínas en el aislamiento clínico, ausentes en la cepa vacunal Tohama I. Entre ellas se detectó una proteína estructural del TTSS. Mediante ensayos de inmunoblot empleando antisuero específico se detectó la expresión de una proteína efectora del TTSS, la proteína Bsp22, sólo en los aislamientos clínicos estando ausente en cepas vacunales y de referencia. Conclusiones: En este trabajo demostramos la expresión funcional del TTSS en aislamientos clínicos de nuestro país y no en las cepas vacunales. Dicha expresión parecería ser una característica inherente de los aislamientos clínicos y podría responder al hecho de que no han sufrido la adaptación a las condiciones de cultivo prolongado en el laboratorio. El TTSS permite la liberación de proteínas efectoras de origen bacteriano dentro de células eucariotas. En patógenos en particular, dichas proteínas constituyen factores de virulencia capaces de alterar distintas funciones de las células del huésped.