IBBM   21076
INSTITUTO DE BIOTECNOLOGIA Y BIOLOGIA MOLECULAR
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Generación y caracterización funcional de baculovirus recombinantes con potencial terapéutico contra adenocarcinoma pulmonar.
Autor/es:
PÉREZ VIDAKOVICS MARÍA LAURA; MARCHESINI ABRIL; ROMANOWSKI VÍCTOR; GÓMEZ BERGNA SANTIAGO MANUEL; PIDRE MATIAS LUIS
Lugar:
Huerta Grande, Córdoba
Reunión:
Congreso; XXXIX Reunión científica anual de la sociedad argentina de virología; 2019
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virología
Resumen:
Losbaculovirus son virus específicos de artrópodos, poseen un genomade DNA de doble hebra circular, que varía entre 80 y 180 kpb. Elbaculovirus tipo (AcMNPV)ha sido ampliamente utilizado como vector de expresión de proteínasheterólogas y, más recientemente, como vector de terapia génica.Unade las enfermedades en las que ha incrementado el uso de vectoresvirales con fines terapéuticos es el cáncer, utilizando diferentesgenes como blanco. En particular, se ha demostrado el rol central dela familia de proteínas conocida como inhibidores de apoptosis (IAP)en el desarrollo, proliferación y agresividad de diferentes tumores.La proteína BIRC6 es un polipéptido de 528 kDa que presenta en laregión N-terminal un dominio BIR de unión a caspasas y un dominiode ubiquitina ligasa (C-terminal) a través de los cuales puedeinhibir la acción de diferentes proteínas efectoras de laapoptosis. Además, BIRC6 desempeña un rol fundamental en el procesode autofagia. También, se ha demostrado que esta proteína essobreexpresada en tumores pulmonares resistentes a las terapiasconvencionales.Elobjetivo de este trabajo consistió en la construcción de diferentesbaculovirus recombinantes capaces de silenciar la expresión del genmediante la expresión de distintos shRNA y la caracterizacióninicial de su efecto en células de adenocarcinoma de pulmón humano.Inicialmentese caracterizó la expresión de la proteína BIRC6 medianteinmunofluorescencia indirecta y citometría de flujo en condicionesnormales y de inducción de autofagia. Por otro lado, se optimizó elprotocolo de transducción con baculovirus en la línea celular A549,utilizando diferentes cantidades de partículas virales por célula.Posteriormentese diseñaron tres shRNA capaces de reconocer como blanco diferentesregiones del gen ,fueron sintetizados y clonados en el vector pBacPAK9-sh. Este vector,además, expresa la proteína roja fluorescente dTomato. Acontinuación, se utilizaron los plásmidos obtenidos como vectoresde transferencia para generar tres baculovirus recombinantes medianterecombinación homóloga en células de insecto. Finalmente, seevidenció el silenciamiento inducido por la transducción con losbaculovirus recombinantes mediante inmunofluorescencia indirecta ycitometría de flujo. La capacidad de los shRNA para inducirapoptosis fue evaluada mediante la técnica de TUNEL.Eneste trabajo pudo detectarse la expresión de la proteína BIRC6 enla línea celular A549. Uno de los baculovirus recombinantesobtenidos fue capaz de vehiculizar un shRNA con el gen como blanco y de reducir efectivamente su expresión. Por último, elmismo fue capaz de inducir apoptosis en un 30% de las célulastratadas. Estosresultados son alentadores y abren camino a futuros ensayos enmodelos animales, postulando al baculovirus recombinante obtenidocomo un posible vector de terapia génica contra adenocarcinoma depulmón. p { margin-bottom: 0.25cm; direction: ltr; color: #00000a; line-height: 120%; text-align: left; orphans: 0; widows: 0 }p.western { font-family: "Liberation Serif", serif; font-size: 12pt; so-language: es-ES }p.cjk { font-family: "Droid Sans Fallback"; font-size: 12pt; so-language: zh-CN }p.ctl { font-family: "FreeSans"; font-size: 12pt; so-language: hi-IN }