IBBM   21076
INSTITUTO DE BIOTECNOLOGIA Y BIOLOGIA MOLECULAR
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Efecto del segundo mensajero guanosina penta/tetrafosfato ((p)ppgpp) sobre la expresión de proteínas en Bradyrhizobium diazoefficiens
Autor/es:
ITURRALDE, ESTEBAN TOMÁS; COTABARREN, AIXA; COLLA, DELFINA; PÉREZ GIMÉNEZ, JULIETA
Lugar:
Ciudad Autónoma de Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XIV Congreso Argentino de Microbiología General-SAMIGE 2019; 2019
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Microbiología General
Resumen:
Cuando al rizobio simbionte de soja {B. diazoefficiens} se lo cultiva con escasez de N, se estimula la velocidad de producción y el número de nódulos en las raíces de esta planta. Las bacterias así cultivadas también resultan más competitivas para nodular respecto a aquellas cultivadas en suficiencia de N. En esta condición de escasez de N se dispararía la respuesta severa (RS), sugiriendo que las mejoras en los parámetros simbióticos evaluados se deben a la expresión de distintos genes dependientes del segundo mensajero (p)ppGpp. Esta hipótesis se apoya en que la mutante en el gen {rsh}, cuyo producto regula la síntesis del (p)ppGpp, {B. diazoefficiens} LP5065, nodula pero fija menos N_2. Consiguientemente, nos planteamos estudiar la RS en {B. diazoefficiens} con el fin de correlacionar los resultados que se obtengan con la capacidad simbiótica de estos rizobios. Así decidimos evaluar la expresión diferencial de proteínas frente a la presencia/ausencia de (p)ppGpp mediante proteómica.Se obtuvieron proteínas enriquecidas en las fracciones de membrana y citoplasmáticas de las cepas {B. diazoefficiens} USDA 110, cepa salvaje, y LP5065; en dos condiciones: Tratada (T) con solución mineral libre de C y N (en la que se dispararía la RS en la cepa salvaje), y No tratada (NT). Las proteínas se analizaron por nanoHPLC acoplado a un espectrómetro de masa con tecnología Orbitrap. Los espectros obtenidos fueron analizados con el programa Proteome Discoverer y los datos obtenidos fueron procesados con el programa Perseus con un análisis estadístico de t de Student con un p-valor ≤ 0,05.En la cepa salvaje identificamos, teniendo en cuenta los resultados de ambas fracciones, 2562 y 2689 proteínas para la condición T y NT, respectivamente. El análisis comparativo entre la condición T y la NT muestra 8 proteínas sobreexpresadas y 10 con menos nivel de expresión. Respecto a la cepa mutante se hallaron 2541 en la condición T y 2531 en la NT, con 7 proteínas sobreexpresadas y 8 proteínas disminuidas en su expresión entre T y NT. Dentro de las proteínas que se detectaron en una condición y no en la otra, identificamos un 1,2% de las proteínas totales en la condición T y un 2,9% en la condición NT para la cepa USDA 110. Para la cepa LP5065 se encontró un 1,7% de las proteínas totales en la condición T y un 2,1% de las proteínas totales en la condición NT.El número de proteínas identificadas es acorde a la resolución de la metodología elegida. A su vez el porcentaje de proteínas que se expresan diferencialmente entre la condición T y NT mostrarían una diferencia en el estado metabólico de ambas cepas sometidas al tratamiento. Del análisis de las proteínas diferenciales entre ambas cepas y condiciones esperamos obtener un esquema de las proteínas que se encuentran regulados en este sistema por (p)ppGpp, y así poder construir un modelo del funcionamiento de la respuesta severa en {B. diazoefficiens}, y su relación con la simbiosis en soja.