IBBM   21076
INSTITUTO DE BIOTECNOLOGIA Y BIOLOGIA MOLECULAR
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
El virus Junín hace uso de la maquinaria autofágica del hospedador para promover su replicación
Autor/es:
URE, AGUSTÍN E.; PEREZ VIDAKOVICS, MARIA LAURA; ARRÍAS, PAULA N.; GOMEZ, RICARDO M.; ROMANOWSKI, VICTOR
Lugar:
Valle Hermoso, Córdoba
Reunión:
Congreso; XXXVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2018
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virología
Resumen:
La autofagia es un mecanismo de degradación altamente regulado que cumple un rol fundamental en la homeostasis celular ya que permite la eliminación de organelas defectuosas y agregados citoplasmáticos. Paralelamente, forma parte de la respuesta inmune innata y adaptativa del hospedador ante infecciones por patógenos. El virus Junín (JUNV) es el agente causal de la fiebre hemorrágica argentina, una enfermedad endémica en nuestro país que presenta una tasa de mortalidad del 20%. El objetivo de este proyecto fue estudiar el rol de la autofagia en la replicación de JUNV.Para evaluar si la infección por JUNV induce autofagia, se realizaron experimentos en la linea celular humana A549. Mediante microscopía confocal, se observó un aumento en el número de vesículas LC3 positivas (marcador de autofagosomas) en células infectadas respecto del control sin infectar, así como la colocalización entre LC3 y proteínas clave del proceso de autofagia o la proteína de nucleocápside viral (N). Paralelamente, se analizó por WB el LC3-II/LC3-I durante el transcurso de la infección y se observó un aumento respecto al control, lo cual indica que la infección viral induce autofagia. Luego se examinó si el flujo autofágico generado durante la infección era completo, es decir, si ocurre la fusión entre el autofagosoma y el lisosoma. Para esto se realizaron experimentos de transfección con el plásmido mCherry-GFP-LC3 (GFP es sensible al pH ácido en el entorno lisosomal) seguidos de infección con JUNV. Se observó un incremento significativo del numero de mCherry positivos. Además, se evaluaron por WB los niveles de las proteínas p62 (indicador de la degradación autofágica) y N en células infectadas con JUNV a diferentes tiempos. En conjunto, estos experimentos permitieron establecer que el flujo autofágico inducido por JUNV es completo. Sin embargo, N no sería degradada a través de este proceso, ya que los niveles de N no disminuyen como si lo hace la proteína p62 del hospedador. Paralelamente, la inducción farmacológica de la autofagia resulta benéfica para el virus, dado que en estas condiciones el título viral y la expresión de N aumenta. Así mismo, se observó que tanto la inhibición farmacológica de la autofagia como el silenciamiento de genes clave de la autofagia influyen negativamente sobre la replicación viral. Para comenzar a indagar los mecanismos por los cuales JUNV induce autofagia en células A549, se realizaron experimentos con virus inactivado por UV. Se observó que la inducción de la autofagia es independiente de la replicación viral, dado que tanto el virus inactivo como el virus replicativo son capaces de generar un aumento en el número de vesículas LC3 positivas. En resumen, el virus Junín aprovecha la autofagia que sería en principio un proceso antiviral, para su beneficio. Conocer los mecanismos moleculares requeridos para la replicación viral permitirán desarrollar herramientas para el tratamiento de la FHA.