Desarrollo de portainjertos de cítricos transgénicos que expresan péptidos antimicrobianos

FURMAN, NICOLAS; GOMEZ, CLAUDIO ANDRES; CANTEROS, BLANCA; REYES, CARINA; GOCHEZ, ALBERTO; HOPP, ESTEBAN; GARDELLA, VICTORIA; CONTI, GABRIELA; KOBAYASHI, KEN; GARCÍA, MARIA LAURA

Mar del Plata

Congreso; IV Congreso Argentino de Microbiología Agrícola y Ambiental (CAMAYA); 2018

El cultivo de cítricos en Argentina se extiende en dos regiones: el Noroeste (NOA), donde se producen naranjas, pomelos y limones y el Noreste (NEA), donde predominan los cultivos de naranjas y mandarinas. En el mundo, la Argentina es el octavo productor de cítricos y primer productor mundial de limones.Las enfermedades bacterianas más importantes en cultivos cítricos son las causadas por las bacterias Xanthomonas axonopodis pv. citri, Xylella fastidiosa y Candidatus Liberibacter asiaticus, produciendo la cancrosis de los cítricos, la clorosis variegada de los cítricos (CVC) y el Huanglongbing (HLB), respectivamente. Estas enfermedades causan una grave disminución en la producción, llevando eventualmente a la muerte de los árboles infectados, con un sustancial impacto económico. Se proponen diferentes estrategias para generación de resistencia a estas enfermedades y la expresión mediante transgénesis de péptidos antimicrobianos se plantea como muy promisoria. Objetivo:Generación de portainjertos transgénicos que expresen péptidos antimicrobianos. Metodología:1) Verificación de la construcción genética (vector binario) que permite la expresión del péptido antimicrobiano lisozima (LYZ). 2) Optimización del protocolo de transformación de explantos del portainjerto Citrange Troyer. 3) Transformación de explantos de C. Troyer con Agrobacterium tumefaciens que portan el plásmido que expresa el péptido antimicrobiano. 4) Selección de los brotes transgénicos mediante genes reporteros y técnicas moleculares. 5) Injerto in vitro de brotes transgénicos para su crecimiento y multiplicaciónResultados:Se verificó la construcción genética que llevan el cassette de expresión del gen LYZ mediante secuenciación y se transformó la cepa EHA105 de Agrobacterium tumefaciens. Se optimizó la metodología de transformación genética del portainjerto C. troyer incluyendo condiciones de crecimiento in vitro, composición de medios, selección de explantos de partida, etc. Se regeneraron brotes transformados in vitro los cuales fueron evaluados por visualización del gen reportero GFP, presente en la construcción. Se injertaron los brotes positivos in vitro en pies etiolados para su crecimiento y posterior multiplicación. Se están analizando por PCR las plántulas transformadas.Conclusiones y Perspectivas: Las líneas transgénicas generadas serán posteriormente desafiadas con las bacterias patógenas en cuestión. Si los portainjertos resultan resistentes se podrían utilizar como pie para variedades cítricas de interés a las que podrían potencialmente transmitir la resistencia o tolerancia.