Miocardiocitos derivados de células madre embrionarias humanas como modelo experimental para el estudio de infecciones por virus coxsackie

QUESTA, MARÍA; SCASSA, MARÍA E.; CIFUENTE, JAVIER; JAQUENOD DE GIUSTI, CAROLINA; GOMEZ, RICARDO M; MIRIUKA, SANTIAGO

Buenos Aires, Argentina

Congreso; XXXV Congreso Argentino de Cardiología; 2009

Objetivos: Establecer un modelo in vitro para el estudio de infecciones por virus Coxsackie B1 (vCB) en miocardiocitos generados a partir de células madre embrionarias humanas (CMEH).Métodos: Las líneas H5, H9 y H16 de CMEH (día 0, D0) fueron diferenciadas por la formación de cuerpos embrioides (CE) durante 14 días (D14). La presencia de los receptores CAR (coxsackie adenovirus receptor), DAF (decay accelerating factor), TLR3 (Toll-like receptor 3), interferón 1 y 2 (IFNI y II) fue analizada por RT-PCR. La expresión de los marcadores cardíacos Nkx2.5, Isl-1, ANP y troponina cardíaca T se evaluó por inmunohistoquímica y RT-PCR en los CE contráctiles. Se evaluó la susceptibilidad a la infección por 2 variantes de vCB (M y N) en D0 y D14 por medio de la observación de efecto citopático, la titulación de la infectividad de los sobrenadantes (SN), y la presencia del RNA viral por RT-PCR. Resultados: Se determinó la expresión génica de los receptores CAR, DAF, TLR3 e INFI y II en 3 líneas de CMEH tanto en estado indiferenciado como en cuerpos embrioides contráctiles y no contráctiles. Las células presentaron signos del efecto citopático viral, el cual fue evidenciado por un progresivo balonamiento a las 12 horas posinfección (PI) y muerte celular en más de un 80% a las 36 horas PI. El cese de contracción precedió la mortalidad celular. La titulación de la infectividad de los SN se correlacionó con la observación del efecto citopático registrándose títulos entre 104 y 105 unidades formadoras de placas/ml. La RT-PCR confi rmó la presencia intracelular del RNA viral. No se observaron diferencias signifi cativas entre las 2 cepas virales.Conclusión: El modelo resultó válido para el estudio de la interacción de vCB-célula madre embrionaria y vCB-célula cardíaca. Este modelo podría ser útil para el estudio de eventos moleculares disparados por la infección en miocardiocitos humanos así como para el ensayo de agentes antivirales.