Funcionalidad del Dominio L de la Proteína Z del Virus Junín en la Interacción con el Complejo ESCRT

ARRÍAS, PAULA N.; ROMANOWSKI, VICTOR; GOMEZ, RICARDO M.; URE, AGUSTÍN E.; PEREZ VIDAKOVICS, MARIA LAURA

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2018

Sociedad Argentina de Virología

Como patógenos intracelulares obligados, los virus explotan y manipulan diversos procesos celulares del hospedador para su propia supervivencia. La autofagia es un proceso celular catabólico involucrado en la degradación y reciclaje de macromoléculas. Además participa en la respuesta inmune del hospedador mediante la eliminación de agentes infecciosos intracelulares como los virus. Sin embargo existen evidencias que algunos virus son capaces de inhibir o incluso inducir la autofagia para promover su ciclo replicativo. Recientemente se ha demostrado que algunos virus envueltos utilizan del complejo ESCRT (Endosomal Sorting Complex Required for Transport), involucrado en la autofagia celular, en diferentes estadios del ciclo viral por ejemplo en el ensamblado y la brotación.La brotación de los arenavirus es promovida principalmente por la proteína de matriz Z aunque también existen evidencias de la participación de factores del hospedador. Los dominios tardíos (dominios L, late-domains) de las proteínas de matriz resultan esenciales para la brotación de los virus envueltos. Estos pequeños dominios se organizan en motivos de cuatro aminoácidos de secuencias PT/SAP, YxxL y PPxY. Modificaciones en estos dominios provocan defectos en la escisión de los viriones de la membrana plasmática. Dada la presencia de late-domains en el extremo C-terminal de la proteína Z del virus Junin (JUNV) y siendo característico de estos dominios la capacidad de interacción con miembros del complejo ESCRT, resulta de particular interés evaluar si esta gran maquinaria proteica está involucrada en la brotación de JUNV.Mediante mutagénesis mediada por PCR se generó un mutante de la proteína Z de JUNV, cuyo dominio tardío de secuencia PTAP fue sustituido por PRGP. Dicho ORF fue clonado en un vector de expresión fusionado a EGFP (pEGFP-ZLmut).Se co-transfectaron células VERO con los plásmidos pEGFP-Zlmut y mCherry-TSG101, este último portador del ORF del miembro del complejo ESCRT TSG101. Se observó mediante microscopía confocal que Z wild-type (wt) de JUNV modificó la distribución subcelular de TSG101, mientras que la proteína Z modificada no tuvo efecto sobre la misma. Ninguna de las variantes de Z co-localizó con TSG101. La infección con JUNV en células transfectadas con el plásmido mCherry-TSG101 tuvo el mismo efecto que la co-transfección con el plásmido portador de Z wt.