Identificación de una región del genoma del baculovirus SfMNPV requerida para activar la maquinaria transcripcional tardía reproducida en base al modelo AcMNPV

BERRETTA, M.F.; JARAMILLO ORTIZ, J.; SCIOCCO-CAP, A. & ROMANOWSKI, V.

Huerta Grande, Córdoba, Argentina

Congreso; XXIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2009

Sociedad Argentina de Virología (Asociación Argentina de Microbiología)

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Los baculovirus son específicos de artrópodos, especialmente de insectos del orden Lepidoptera. Producen una infección letal en sus hospedantes susceptibles y se utilizan como insecticidas biológicos para el control de plagas agrícolas y forestales. Constituyen una alternativa no contaminante para reemplazar o limitar el uso de insecticidas químicos debido a su alta virulencia, especificidad y factibilidad de producción a escala económica. En nuestro país varias especies se encuentran en distintas etapas de desarrollo como insecticidas, entre ellas el nucleopoliedrovirus (NPV) de Spodoptera frugiperda (SfMNPV), que presenta potencial para el control de la plaga homónima. La familia Baculoviridae es muy diversa; dentro del género NPV de lepidópteros se reconocen dos grupos filogenéticos: NPV I, y NPV II. Al primero de estos grupos pertenece la especie tipo Autographa californica NPV (AcMNPV). AcMNPV causa una infección productiva en células de Spodoptera frugiperda (células SF); la misma se caracteriza por la sucesión temporal de tres fases de expresión génica: temprana, tardía y muy tardía. La transcripción de genes tardíos depende de al menos 19 genes o lefs (late expression factors) identificados en ensayos de expresión transitoria. Se ha comprobado que algunos lefs participan en la determinación del rango de hospedante in vitro, por lo cual se los considera genes candidato para modular dicha característica en los aislamientos naturales, por medio de modificación genética. SfMNPV pertenece al grupo NPV II; en los miembros de este grupo algunos lefs de AcMNPV no están conservados, por lo cual, otros genes aún no identificados podrían reemplazar su función. En el presente trabajo utilizamos a SfMNPV como modelo para el análisis funcional del conjunto de lefs conservados evolutivamente en el grupo NPV II, para posteriormente evaluar su potencial participación en la determinación del rango de hospedante. Para ello hemos adaptado el sistema de expresión transitoria desarrollado para la identificación de lefs en AcMNPV. El mismo consiste en la cotransfección de céluas SF con a) el gen indicador CAT clonado en vector plasmídico bajo control del promotor tardío del gen de la proteína mayoritaria de la cápside, vp39, y b) todos los lefs clonados individualmente (genoteca de lefs) o como parte de fragmentos genómicos. Para construir la genoteca de lefs de SfMNPV, cada lef fue clonado individualmente en un plásmido bajo el promotor hsp70 de Drosophila. La genoteca de lefs de SfMNPV no resultó funcional para transactivar el promotor tardío, en este sistema. Sin embargo, se obtuvo transactivación del promotor cuando la genoteca de lefs se cotransfectó junto con cada uno de dos fragmentos genómicos. Dichos fragmentos representan en total el 15% del genoma viral aproximadamente y comparten un único ORF completo en la región de solapamiento de sus respectivos extremos. Conclusión: Se identificó una región del genoma de SfMNPV conteniendo al menos un ORF cuyo producto aporta funcionalidad al conjunto de lefs de SfMNPV conocidos por identidad de secuencia con los lefs de AcMNPV.