Baculovirus para terapia génica de tumores

ROMANOWSKI, VÍCTOR; JAITA, GABRIELA; ZUCCATO CAMILA; SEILICOVICH, ADRIANA; IMSEN, MERCEDES; GOTTARDO, MARÍA FLORENCIA; CANDOLFI, MARIANELA; ASAD, ANTONELA S.; PIDRE, MATÍAS L.

Mesa redonda; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

style type="text/css">p { margin-bottom: 0.25cm; direction: ltr; color: rgb(0, 0, 0); line-height: 120%; }p.western { font-family: "Calibri", sans-serif; font-size: 11pt; }p.cjk { font-family: "Calibri", sans-serif; font-size: 11pt; }p.ctl { font-family: "Times New Roman", serif; font-size: 11pt; }Los baculovirus son virus envueltos que infectan principalmentelepidópteros. Dada la capacidad transductora de los baculovirus endiferentes cultivos celulares y tejidos de vertebrados y su inocuidaddebida a la incapacidad de replicar en dichos tipos celulares, segeneró un baculovirus AcMNPV recombinante, capaz de vehiculizarcassettes de silenciamiento.La humanina (HN) es un péptido aislado originalmente de cDNA deneuronas de un paciente con enfermedad de Alzheimer. Este péptidoposee una acción citoprotectora en diferentes tipos celulares comoneuronas, linfocitos y células germinales testiculares.Previamente hemos demostrado que la HN disminuye la apoptosis decélulas GH3, una línea de células pituitarias tumorales. Enestudios preliminares se observó una sobre-expresión significativade HN en estas células . Por ello surgió el interés de contar conun método que permita analizar el comportamiento de las célulastumorales al silenciar la expresión endógena de HN.Para llevar a cabo dicho objetivo se diseñó un shRNA (shorthairpin RNA) con parte de la secuencia del mRNA de la HN y deratina (HNr, un péptido análogo en rata) como blanco (target)y se sintetizó un cassette capaz de dirigir su expresiónbajo el control del promotor U6. Además, para poder diferenciar lascélulas transfectadas exitosamente, se incluyó en la construcciónel gen indicador dTomato (proteína fluorescente roja) bajo elcontrol del promotor del gen ie1 de citomegalovirus.Al transfectar las células GH3 con plásmidos portadores delcassette de silenciamiento, se observó una disminución en laintensidad de inmufluorescencia de HN comparada con las célulastransfectadas con el control pUC57-shRNA(-). Posteriormente, sedeterminaron los niveles de mRNA de HNr mediante qPCR. Luego, sedeterminó la apoptosis (por TUNEL) de células transfectadas conpUC57-shRNA(HN). Las células transfectadas con el shRNA de HNpresentaron más del doble del porcentaje de apoptosis que lascélulas tratadas con el control. Estos resultados indican que la HNendógena tiene un rol antiapoptótico en células pituitariastumorales.Luego, se generó el baculovirus recombinante Ac-shHNr por doblerecombinación homóloga. Los recBV fueron capaces de transducircélulas GH3, así como células C6 y U251 de gliobastoma y célulastumorales humanas de ovario (KGN) e inducir apoptosis en los cultivoscelulares transducidos. Al realizar ensayos in vivo utilizandocomo modelo ratones nudecon tumores pituitarios implantados (células GH3) pudimos observarque el tratamiento con el baculovirus recombinante disminuyósignificativamente la progresión tumoral e incrementó la sobrevidaa más de un 70%.El perfeccionamiento de esta estrategia permitirá evaluar el efectodel silenciamiento de HN en diferentes tipos de tumores y supotencial uso para el tratamiento de los mismos a través de terapiagénica.