Análisis filogenético de cepas de Bradyrhizobium spp aisladas de suelos sojeros argentinos.

ANÍBAL R. LODEIRO; JULIETA PÉREZ GIMÉNEZ; ESTEBAN T. ITURRALDE

Rosario

Congreso; XXIII CONGRESO LATINOAMERICANO DE MICROBIOLOGÍA.; 2016

Asociación Latinoamericana de Microbiología

Ante la escasez de compuestos nitrogenados asimilables en el suelo se establece una interacción simbiótica entre las raíces de soja y ciertos rizobios de donde surge una nueva estructura llamada nódulo. Allí se producirá la reducción de N2 atmosférico a amonio, forma asimilable por la  planta  de  este  elemento.  Regularmente,  los  productores  de  soja emplean inoculantes que contienen cepas de  Bradyrhizobium  spp.  (B. japonicum o B. diazoefficiens) para proveer de N asimilable a las leguminosas. En la Argentina, hace ya unos años,  INTA  recomienda que  se utilice  la especie B.  japonicum E109; sin embargo,  las empresas pueden comercializar distintas especies de rizobios en sus formulaciones. De este modo, a lo largo de las distintas cosechas, se estableció una población de  rizobios noduladores  alóctona que derivan de  inoculaciones previas  y que  sobrevivieron en el ambiente. Trabajos desarrollados en otros países de la región demostraron que las poblaciones alóctonas aisladas de suelos con historial de cultivo de soja poseen un alto polimorfismo en comparación con las cepas de los inoculantes. De este modo, nos pareció necesario conocer la diversidad de rizobios noduladores de soja en las poblaciones alóctonas de distintos suelos sojeros argentinos. Nuestro  laboratorio consta con un cepario de  rizobios provenientes de distintos suelos ácidos con historial de soja, de las cuales se eligieron diez  cepas  representativas.  Estudiamos  sus  cinéticas  de  crecimiento  y  algunas  tienen  velocidades  de  crecimiento  similares  a  E109 y otras levemente menores. Con el fin de iniciar la clasificación de estas cepas alóctonas, se amplificó una región variable del ARNr 16S. El análisis de estas secuencias arrojó una alta similitud de nucleótidos con respecto a cepas pertenecientes a los géneros B. japonicum y B. diazoefficiens. Estudios en filogenia de rizobios, prueban que la secuenciación  del  ARNr  16S  no  es  suficiente  para  dilucidar  género  y  especie. Y proponen elaborar árboles  filogenéticos concatenando distintos genes housekeeping como recA, atpD y glnII. Por  lo tanto, buscamos sus secuencias en distintas  especies  de  Bradyrhizobium para realizar el árbol filogenético que nos permita determinar  el  género  de  los  rizobios  aislados. Secuenciamos  los  genes de  nuestros  aislamientos,  alineamos  las  secuencias  con  el programa BioEdit  y  las depuramos.  Las  filogenias  fueron realizadas con el programa MEGA7. Se estimaron por los métodos de Maximun Likelihood y Neighbor‐Joining con un bootstrap de 1000 con el mejor modelo que se adecuaba a cada conjunto de secuencias, brindado por la plataforma JModelTest. A su vez, concatenamos las secuencias de los tres genes y ejecutamos un nuevo árbol. Con este  análisis bioinformático  confirmamos que  las especies de  rizobios  están  cercanamente  emparentadas  y  que  las  secuencias de esos genes housekeeping son muy similares entre sí. Además, confirmamos el género de los distintos rizobios aislados.