IBBM   21076
INSTITUTO DE BIOTECNOLOGIA Y BIOLOGIA MOLECULAR
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Mejoramiento del baculovirus de Anticarsia gemmatalis como agente de control biológico mediante la incorporación de proteínas heterólogas en los cuerpos de oclusión.
Autor/es:
FABRE, ML (1); HAASE, S (1); ROMANOWSKI, V (1).
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XXXVI Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Virología; 2016
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virología (SAV)
Resumen:
El virus de la poliedrosis nuclear múltiple de (AgMNPV) ha sido utilizado con éxito en países con climas cálidos para el control biológico de la oruga de las leguminosas, una plaga que ocasiona daños importantes en el cultivo de soja y otras leguminosas. Sin embargo, su velocidad de acción lenta en climas templados limita su aplicación en otros países como Argentina. Una de las estrategias más utilizadas para el mejoramiento de los baculovirus consiste en la incorporación de genes heterólogos candidatos a mejorar las propiedades insecticidas en el genoma del virus. Sin embargo, la liberación y comercialización de baculovirus recombinantes se encuentra limitada por las restricciones regulatorias impuestas a organismos genéticamente modificados. Aquí se propone una estrategia novedosa basada en la producción de cuerpos de oclusión de baculovirus en líneas celulares transgénicas que expresan proteínas heterólogas candidatas en dirigidas al cuerpo de oclusión de AgMNPV. El objetivo es desarrollar líneas celulares de insecto productoras de proteínas quiméricas compuestas de un polipéptido estructural del cuerpo de oclusión viral y una proteína candidata a mejorar las propiedades insecticidas de AgMNPV. En una primera etapa se insertarán sitios de restricción en el marco de lectura del gen en la región flanqueante del ORF () por PCR utilizando como molde el DNA genómico de AgMNPV. Los sitios de restricción incorporados se utilizarán para el clonado en fase de los genes candidatos: , y de EpapGV, de LdMNPV, y (Hv1a), previamente amplificados por PCR a partir de moldes plasmídicos, genómicos y/o DNA sintéticos. Los diferentes marcos de lectura quiméricos generados se clonarán en vectores de expresión derivados del plásmido (pIB/V5-His, InvitrogenTM), que permite la expresión constitutiva de genes en células de insecto. Se transfectarán células High FiveTM con la construcción obtenida y se seleccionarán con blasticidina o puromicina, según corresponda. Finalmente se procederá al desarrollo de líneas celulares monoclonales mediante aislamiento clonal por dilución terminal. Hasta el momento, se amplificaron por PCR los ORF de los genes , , , , y y mediante SOE-PCR el gen (Hv1a). Se amplificaron dos copias de cada ORF para generar fusiones N-terminal y C-terminal de PEP (proteína de envoltura del poliedro) y luego, se procedió al clonado de cada uno de ellos en el vector pGEM-T-EasyTM. Cada vector generado fue caracterizado por secuenciación. Posteriormente, los vectores de clonado se digirieron con las enzimas de restricción seleccionadas para insertar las fusiones quiméricas en el vector de expresión pIB. Próximamente se generarán las líneas celulares de insecto con el fin de producir los cuerpos de oclusión quiméricos de AgMNPV.