Estudio de la alteración del procesamiento y acumulación del miR156 en plantas de Citrus sinensis (naranjo dulce) infectadas con Citrus Psorosis Virus

REYES CA; MARMISOLLÉ, FE; OCOLOTOBICHE E; BAZZINI AA; ASURMENDI S; GARCIA ML

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología (CAV); 2015

Plantas de naranja dulce (Citrus sinensis (L.) Osbeck) fueron infectadas con CPsV y se observó una desregulación en la acumulación de un grupo de miRNAs conservados de la planta. Los niveles de las especies maduras de los miRNAs en las muestras de tejido infectado, evaluadas por Northern blot, disminuyeron respecto a las muestras sanas y se registró además un aumento concomitante de sus transcriptos targets (analizados por RT-qPCR). En particular el miR156 y sus targets SPLs (Squamosa Transcription Factors) fueron de los más afectados. Los precursores e intermediarios de procesamiento de dicho miRNA fueron también analizados mediante ensayos de Northern blot y corroborados por ensayos de RT-qPCR. Las muestras de tejido infectadas mostraron un aumento de la acumulación de los precursores no procesados (pre-miRNAs) respecto de las sanas. En particular se observó que el pre-miR156 de 143 bp se procesa mediante un mecanismo del tipo loop to base de dos cortes que también fue confirmado por modelaje bioinformático de las secuencia de los 7 miembros de la familia de precursores del miR156. Mediante Northern blots se detectaron los productos de ambos cortes. El primer corte produce dos especies intermediarias; una de 41 pb que constituye el loop principal y dos de 51 bp que incluyen los dos brazos del tallo principal y la secuencia madura. El segundo corte libera la especie madura. En las muestras infectadas la acumulación de estos intermediarios se encuentra reducida concomitantemente con el mencionado aumento en los precursores no procesados. Los resultados obtenidos nos permiten proponer la existencia de una asociación entre alguna o varias de las proteínas y/o RNAs virales y los precursores de miRNAs, que impediría el normal procesamiento de los mismos por la maquinaria de silenciamiento.