Estudio de los factores de transcripcion de la fase tardía de un baculovirus autóctono de Spodoptera frugiperda

JOSÉ M. JARAMILLO ORTIZ; ALICIA SCIOCCO DE CAP; VÍCTOR ROMANOWSKI; MARCELO F. BERRETTA

Buenos Aires, Argentina

Conferencia; XXVIII Reunión Científica Anual; 2008

Sociedad Argentina de Virología

Los baculovirus son virus específicos de invertebrados, especialmente de insectos del orden Lepidoptera, que causan una infección letal en sus hospedantes susceptibles. Varios de ellos se comercializan como insecticidas biológicos para el control de plagas agrícolas. Para competir con los insecticidas químicos, el desarrollo de insecticidas baculovirales contempla la posibilidad de modificar los aislamientos naturales para aumentar su velocidad de acción, modificar su rango natural de hospedantes y optimizar su producción a escala comercial. La familia Baculoviridae es muy diversa y se reconocen cuatro géneros: nucleopoliedrovirus (NPV) de lepidópteros, NPV de dípteros, NPV de himenópteros, y granulovirus (GV) de lepidópteros. Dentro de los NPV de lepidópteros se reconocen dos grupos filogenéticos: NPV I y NPV II. Al primero de éstos pertenece la especie tipo, Autographa californica NPV (AcMNPV). El estudio de esta especie ha alcanzado mayor desarrollo por su difundida utilización como vector de expresión en células de insecto. AcMNPV causa una infección productiva en células de Spodoptera frugiperda (células SF); la misma se caracteriza por la sucesión temporal de tres fases de expresión génica: temprana, tardía y muy tardía. La transcripción de genes tardíos depende de al menos 19 genes o lefs (late expression factors) identificados en ensayos de expresión transiente. Se ha comprobado que algunos lefs participan en la determinación del rango de hospedante in vitro. En los miembros del grupo NPV II algunos lefs no están presentes, por lo que otros genes no identificados podrían reemplazar su función. Nuestro laboratorio ha realizado estudios de caracterización de un aislamiento autóctono del NPV de S. frugiperda (SfMNPV; NPV II), el cual presenta potencial para ser usado en el control biológico de este lepidóptero plaga de varios cultivos en nuestro país. El genoma de SfMNPV ha sido secuenciado recientemente y presenta la mayor similitud de secuencia con el de S. exigua (SeMNPV; NPV II). A pesar de ello, SfMNPV infecta productivamente células SF, mientras que SeMNPV no produce infección en estas células. En el presente trabajo proponemos utilizar a SfMNPV como modelo para el análisis funcional del conjunto de lefs de un NPV II y evaluar su potencial participación en la determinación del rango de hospedante, por comparación con los lefs de SeMNPV. Para ello hemos adaptado el sistema de expresión transiente desarrollado para la identificación de lefs en AcMNPV. El mismo consiste en la cotransfección de células SF con a) el gen indicador CAT clonado en vector plasmídico bajo control del promotor tardío del gen de la proteína mayoritaria de la cápside, vp39, y b) todos los lefs clonados individualmente o como parte de fragmentos genómicos. La cotransfección de células SF con el plásmido indicador y el ADN genómico de SfMNPV resultó en actividad CAT, a diferencia de lo ocurrido en la cotransfección con ADN de SeMNPV. Se ha completado la construcción de una genoteca de lefs de SfMNPV, en la que cada lef fue clonado individualmente bajo el promotor del gen hsp70 de Drosophila. Se dispone además, de una genoteca similar de SeMNPV. Ambas serán comparadas en su capacidad de promover actividad CAT. Este sistema permitirá realizar por primera vez el screening sistemático del genoma de un NPV II, SfMNPV, para identificar posibles lefs no conocidos y detectar los homólogos de SeMNPV cuya falta de funcionalidad en el sistema pudiera indicar su participación en la determinación del rango de hospedante.