GENERACION DE UNA LINEA CELULAR TRANSGENICA QUE EXPRESA EL GEN ESENCIAL 1629 DEL BACULOVIRUS DE ANTICARSIA GEMMATALIS CON PROYECCION AL DESARROLLO DE UN SISTEMA DE RECOMBINACION CON ALTA EFICIENCIA

MARÍA LAURA FABRE; SANTIAGO HAASE; MARÍA LETICIA FERRELLI; MATÍAS LUIS PIDRE; VÍCTOR ROMANOWSKI

Buenos Aires

Congreso; XI CONGRESO ARGENTINO DE VIROLOGÍA 2015 - II Congreso Latinoamericano de Virología; 2015

Sociedad Argentina de Virología-Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

El virus de la poliedrosis nuclear múltiple de Anticarsia gemmatalis(AgMNPV) ha sido utilizado con éxito en paises con climas cálidos parael control biológico de la oruga de las leguminosas, una plaga queocasiona pérdidas en el cultivo de soja y otras leguminosas. Sinembargo, su velocidad de acción lenta en climas templados limita suaplicación en otros países como Argentina. Una herramienta quepermite el mejoramiento de las propiedades insecticidas de losbaculovirus consiste en la ingeniería genética de sus genomas,usualmente basada en la recombinación homóloga entre el virus y unvector de transferencia apropiado. La frecuencia de recombinación esmuy baja y por eso la proporción de virus recombinantes suele sermenor al 1%, el aislamiento de virus modificados resulta muy laboriosoy demanda mucho tiempo. Por esto, se han desarrollado sistemas deselección que permiten aumentar la proporción de virusrecombinantes, algunos de ellos basados en la generación de virusdeficientes en genes esenciales, incapaces de subsistir en célulasinfectadas, que recuperan el gen eliminado al recombinar con un vectorde transferencia. Para comenzar a abordar la generación de un sistemade recombinación de alta eficiencia para AgMNPV, se desarrolló unalínea celular que permitirá el mantenimiento de un virus AgMNPVdeficiente en el gen esencial 1629.MétodologíaSe construyó un vector plasmídico para la generación de la línea celulartransgénica que exprese constitutivamente el gen 1629, basado en elvector de selección pIB/V5-His. Se transfectaron células High Five conesta construcción y se aislaron clones de células transgénicas medianteun procedimiento de dilución terminal. La línea celular obtenida fueinfectada con un bácmido de AcMNPV (virus de la poliedrosis múltiplede Autographa califormica) deficiente en el gen 1629. Finalmente, seevaluó la producción de virus brotantes del bácmido en estas célulasinfectando una línea celular (XXL-GFP) que posee un gen indicador bajoun promotor viral tardío.ResultadosSe desarrolló la línea celular High Five-1629Ag que permite expresa elgen 1629 constitutivamente. Para analizar la complementaciónfuncional de la línea transgénica, se infectaron, en una línea tituladora(XXL-GFP), los sobrenadantes de las células High Five-1629Ag y HighFive, previamente transfectadas con el bácmido. Se observófluorescencia sólo con el sobrenadante de High Five-1629Ag, indicandoque el bácmido sólo puede formar viriones brotantes funcionales enestas células. Para la eliminar parte del gen 1629 de AgMNPV secotransfectó el DNA genómico de este virus con un plásmido de transferencia. La recombinación homóloga entre ambos se verificó porla expresión de un gen indicador del vector (GFP).ConclusionesLa línea celular transgénica generada permitió la complementación deun bácmido deficiente en el gen 1629 y podría utilizarse asímismo parael mantenimiento de un AgMNPV con una deleción en este gen.