Viabilidad y patogenicidad como factores importantes en la inducción de NETs (Neutrophil Extracellular Traps) por Leptospira

EMILIA SCHARRIG; AGOSTINA CARESTIA; GABRIELA PRETRE; MARIA FLORENCIA FERRER; MIRTA SCHATTNER; RICARDO GOMEZ

Taller; I Taller sobre evasión inmune; 2014

La leptospirosis es una zoonosis mundial reemergente causada por espiroquetas del género Leptospira cuya patogénesis no está aclarada. Los neutrófilos poseen un importante papel en la eliminación de patógenos mediante  fagocitosis, degranulación y NETs. En este trabajo estudiamos la influencia de la concentración, la patogenicidad, la viabilidad, la movilidad de leptospiras y el efecto de las plaquetas en la formación de NETs por polimorfonucleares (PMN) humanos, en ensayos in vitro. Las cepas patogénicas Leptospira interrogans serovar Copenhageni (LIC) y serovar Manilae (LIM), y la saprófita Leptospira biflexa serovar Patoc (PATOC) fueron capaces de inducir NETs (DNA en el sobrenadante, fluorometría) de manera dependiente de la concentración. El máximo nivel de DNA se alcanzó con las 3 cepas a una concentración de 1x107 leptospiras/ml (0,55±0.07; 0,38±0.05; 0,33±0.05 y 0,05±;0.01 ug/ml de DNA, en PMN incubados o no con LIC, LIM y PATOC respectivamente, n=6). Comparando LIC con PATOC, se observó que la viabilidad y la patogenicidad son factores importantes en la generación de NETs mediada por leptospiras, ya que los niveles de DNA fueron mayores en los sobrenadantes de  las bacterias vivas que en las inactivas y en los de las patogénicas respecto a las saprófitas. LICv=0,57±0,11 vs LICi=0,41±0,10*; PATOCv=0,33±0,05 vs PATOCi=0,2±0,07µg/ml*, *p<0,05 t-test; LICv vs PATOCv**, **p<0,01 t- test). No se observaron diferencias significativas en la capacidad de formación de NETs mediada por leptospiras (patogénicas o saprófitas) móviles o mutantes inmóviles. Mientras la estimulación de plaquetas con lipopolisacárido (LPS) potenció la formación de NETs (0,45±0.07; 0,83±0.05*p<0,05;ug/ml de DNA en PMN estimulados con LPS o LPS y plaquetas), LIC no tuvo efecto. En conclusión, nuestros datos muestran que Leptospira induce la formación de NETs y que la vitalidad y la patogenicidad son factores importantes, no así la movilidad, ni el reconocimiento por plaquetas.