IBBM   21076
INSTITUTO DE BIOTECNOLOGIA Y BIOLOGIA MOLECULAR
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Aislamiento y caraterización de plásmidos de Acinetobater spp. Multresistentes a antibióticos
Autor/es:
SALTO, ILEANA; TORRES TEJERIZO, GONZALO; MARTINI, M. CARLA; LÓPEZ JOSÉ LUIS; ALBICORO, FRANCISCO JAVIER; SALAS, M. EUGENIA; LOZANO MAURICIO; DEL PAPA, M. FLORENCIA; FERNÁNDEZ CANIGIA L; RODRIGUEZ V; FREULER C; DURLACH R; LAGARES, ANTONIO; PISTORIO, MARIANO
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología (CAM 2013). II Congreso de Microbiología Agrícola y Ambiental (DIMAyA); 2013
Resumen:
Introducción: Los plásmidos y otros
elementos móviles desempeñan un papel importante en la adaptación de las
bacterias a los entornos cambiantes donde pueden hallarse.
Un claro ejemplo es la actual
epidemia de patógenos humanos con múltiples resistencias a antibióticos, la
cual se debe en parte a la
propagación de información genética por transferencia
horizontal. Los aislamientos bacterianos contienen a menudo plásmidos
pequeños que abarcan solamente genes de la replicación y algunos genes
asociados a actividades no esenciales en condiciones de crecimiento en el
laboratorio. Sin embargo otros plásmidos son vehículos portadores de
información ligada a necesidades funcionales transitorias (resistencias a
antibióticos, funciones simbióticas y patogénicas, etc). Por esta razón, la
obtención y caracterización de la
información genética asociada a plásmidos, en particular, y al moviloma, en general, permitirá diseñar nuevas estrategias con el fin de ayudar a desplazar
los posibles plásmidos de resistencia a antibióticos de ambientes hospitalarios, y con ello, disminuir la frecuencia de aparición de aislamientos multiresistentes.
Materiales y Métodos: Se abordó
la búsqueda de plásmidos bacterianos a partir
de aislamientos multiresistentes hospitalarios.
Se trabajó con
64 aislamientos de Acinetobacter spp,
provenientes de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires, seleccionados por presentar resistencia a 3 o más agentes microbianos. La
existencia de plásmidos fue demostrada mediante geles de lisis in situ (Eckhardt). A las cepas que poseían replicones
extracromosomales se les realizó una extracción de ADN siguiendo el método de
Kieser (1984) en pequeña y gran escala. Posteriormente, los plásmidos fueron purificados
mediante gradientes en CsCl y se secuenció la muestra usando la tecnología MiSeq-Illumina. Por último, las lecturas obtenidas fueron
ensambladas, anotadas y analizadas in
silico.
Resultados: En un 89% de los aislamientos analizados se detectó la presencia de
plásmidos por medio de los geles de lisis in
situ. Se observaron distintos
perfiles, tanto en cantidad como en tamaño de los replicones. Los tamaños de
los replicones, estimados según su migración relativa a plásmidos de PM
conocido, varían entre 2 y 60 kpb.
Los resultados de la secuenciación mostraron
un total de 1.419.341 lecturas que cubrieron un total de
347.374.930 pb, alcanzando un valor de cobertura de aproximadamente 650. Se
realizó el ensamblado de las lecturas obtenidas y se obtuvieron 40 contigs, de los cuales 23 corresponden a
19 plásmidos completos. El análisis preliminar
de los datos obtenidos en la secuenciación permitió concluir que el método de detección,
aislamiento y purificación de estos plásmidos fue exitoso. Esto nos permitirá extender
la búsqueda de plásmidos en Acinetobacter
spp. y profundizar la caracterización de su moviloma mediante el análisis
molecular y funcional de la
información contenida en estos replicones.