Estudios de movilización del plásmido críptico pLPU88b de Sinorhizobium meliloti en el ambiente suelo, en condiciones de campo y en microcosmos

GIUSTI M. A.; LOZANO M. J.; TORRES TEJERIZO G. A.; MARTINI M. C.; SALAS M. E.; PISTORIO M.; DEL PAPA M. F.; ETCHEGARAY R.; MORETTI E.; LAGARES A.

Piriápolis

Congreso; XXV Reunión Latinoamericana de Rizobiología (RELAR); 2011

RELAR

Mediante el uso de inoculantes de rizobios se introducen a los suelos de cultivo bacterias seleccionadas en base a sus capacidades destacadas de competición para la nodulación y fijación de nitrógeno. En ese marco, sin embargo, poco se ha investigado respecto del impacto de la inoculación en lo que hace a la dispersión de genes desde la cepa introducida a la comunidad de rizobios y a otras bacterias presentes en el suelo. Teniendo en cuenta que muchos rizobios son portadores de plásmidos y/o de islas simbióticas transmisibles, es importante conocer la frecuencia con que tienen lugar eventos de transferencia horizontal de genes desde rizobios inoculados en semillas hacia rizobios alóctonos del suelo con el objetivo de estimar el impacto de las cepas introducidas sobre el germoplasma de los rizobios (y de otras bacterias) presentes en el suelo inoculado. En este trabajo exploramos eventos de transferencia plasmídica a partir de la liberación de la cepa de Sinorhizobium meliloti LPU88AII (Smr, Spr, Gmr, todas resistencias espontáneas) portadora de un plásmido movilizable (pLPU88b). La misma fue inoculada sobre semillas de alfalfa siguiendo las prácticas regulares utilizadas a campo. Mediante un ensayo de PCR investigamos la presencia del plásmido pLPU88b en los rizobios alóctonos que nodularon dichas plantas, y en aquellos que nodularon plantas ?trampa? sembradas a largo del primer año y medio post-siembra. En esas condiciones de ensayo y luego del análisis de más de 1400 nódulos, la inoculación de la cepa de S. meliloti no resultó en la recuperación de rizobios transconjugantes noduladores de alfalfa portadores del plásmido pLPU88b. La transferencia del plásmido pLPU88b, fue también evaluada en un ensayo de microcosmos en el que además de una cepa inoculante dadora, esta vez S. meliloti LPU88 (pSmeLPU88b::Tn5, Nmr), se introdujo como receptora la cepa Agrobacterium tumefaciens UBA PF2. La búsqueda de transconjugantes que pudieron formarse en la masa del suelo y en la rizósfera durante el ensayo de microcosmos fue realizada a lo largo de 35 días luego de la inoculación, encontrándose valores de transferencia menores a 8,7 x 10-5 e iguales a 6,8 x 10-7 transconjugantes/célula dadora en la masa suelo y en la muestra rizosférica respectivamente. Teniendo en cuenta que el número de rizobios en suelos naturales de cultivo oscila generalmente entre 10-105/g de suelo (mucho menor que el número presente en nuestros ensayos de microcosmos), puede inferirse que la transferencia conjugativa en suelo de plásmidos como el estudiado en este trabajo, es un evento de baja frecuencia y significativo sólo en el contexto de la evolución genética de la población a largo plazo.