Método para la extracción de RNA basado en el uso nanopartículas magnéticas

NATALIA CAPRIOTTI; VÍCTOR ROMANOWSKI; MARÍA FLORENCIA LÓPEZ; LUCIANA JUNCAL; CRISTIAN LILLIO; MARIANO FONTICELLI; LUCILA TRAVERSO; MARÍA LETICIA FERRELLI; PEDRO MENDOZA ZÉLIS; PATRICIA SCHILARDI; CAROLINA VERICAT; SHEILA ONS; MATÍAS LUIS PIDRE; LESLIE AMORÓS; ELISA DE SOUSA; GABRIEL LAVORATO; CLAUDIA RODRÍGUEZ TORRES

Posadas ? Misiones

Congreso; 6º Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos; 2021

Universidad Nacional de Misiones

El aislamiento y purificación de RNA de calidad es un paso fundamental para asegurar una alta especificidad y sensibilidad en la detección, cuantificación y diagnóstico de enfermedades por RT-qPCR. Los métodos de obtención de ácidos ribonucleicos deben ser robustos y de alto rendimiento con alta capacidad de fabricación y distribución. En la actualidad, la mayoría de los kits comerciales utilizados son costosos, poseen a menudo múltiples componentes que no son fácilmente reemplazables y su suministro no se puede garantizar dado que son importados. Además, algunos de ellos requieren de equipamiento sofisticado, no siempre disponibles en los laboratorios de investigación y diagnóstico. Por ende, la metodología disponible no ofrece suficiente flexibilidad y disponibilidad cuando se trata de una gran epidemia o una pandemia, como lo es la de COVID-19. El objetivo del trabajo es proporcionar un protocolo de extracción de RNA basado en perlas magnéticas de sílice de bajo costo, independiente de equipamiento sofisticado y de producción nacional. El procedimiento de extracción por este método incluye etapas de inmovilización rápida y eficiente de las moléculas de RNA sobre la superficie de las nanopartículas y la posterior aplicación de campos magnéticos lo cual permite separar de forma rápida y eficiente los ácidos nucleicos evitando pasos de centrifugación. El cambio en la concentración de sales en el medio permite una elución eficiente para los posteriores pasos de amplificación por el método de elección. Se han realizado pruebas de extracción en distintas muestras biológicas: tejidos provenientes de insectos, línea celular de pulmón y muestras de hisopado oro- y nasofaríngeos de pacientes sospechados de tener coronavirus; se obtuvieron niveles de rendimiento y calidad de RNA similares a los kits disponibles comercialmente y además hemos logrado niveles de Ct (-Cyclethreshold-) igualables por RT-qPCR. En esta presentación se describirán los antecedentes de esta metodología, el estado actual del proyecto y las perspectivas de implementación en laboratorios de diagnóstico y de biología molecular.