IGEVET   21075
INSTITUTO DE GENETICA VETERINARIA "ING. FERNANDO NOEL DULOUT"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Expresión de las proteínas M y GP5 del virus de la arteritis equina
Autor/es:
METZ GE; SERENA M; GAMBARO S; PANEI CJ; DIAZ S; NOSETTO EDGARDO; ECHEVERRÍA MARÍA
Lugar:
Villa Giardino, Córdoba
Reunión:
Jornada; XXX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2010
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virología
Resumen:
Introducción: El virus de Arteritis Equina (VAE) pertenece al orden Nidovirales, familia Arteriviridae, género Arterivirus. La  característica mas relevante de la infección por el VAE es producir infecciones subclínicas. Sin embargo, de manifestarse la enfermedad, los signos clínicos más importantes son abortos, enfermedad respiratoria en animales adultos y neumonía en potrillos. Los ORF5 y ORF6 del genoma viral codifican para las proteínas gP5 y M respectivamente. La proteína gP5 es la proteína de mayor inmunogencidad de la partícula viral. Sin embargo su interacción con la proteína M es crítica para la infectividad y expresión de determinantes antigénicos del VAE. Objetivo: EL objetivo general de este trabajo fue expresar las proteínas gP5 y M completas en el sistema baculovirus/células de insecto y evaluar la capacidad antigénica de las proteínas expresadas. Materiales y Métodos: Se utilizó la cepa LP02/C como molde para la obtención de los genes que codifican para las proteínas de interés. Los genes elegidos se clonaron en el vector pFastBacHT-B a través de los sitios de reconocimiento de enzimas presentes en los cebadores utilizados en la PCR. Las construcciones resultantes se emplearon para transformar células DH10Bac en donde se indujo la transposición sitio específica del gen de interés desde el vector de transferencia al bácmido salvaje presente en estas células. El bácmido recombinante se recuperó de las células DH10Bac y se lo utilizó en la transfección de células de insecto Sf9.  Cada uno de los baculovirus recombinantes (Bac-M y Bac-gP5) se amplificó, tituló y se empleó para la expresión y recuperación de las proteínas de interés. Se inocularon animales de experimentación Balb/C y con el suero obtenido se estudió la capacidad inmunogénica de las proteínas mediante Western Blot y Neutralización Viral. Resultados: En la técnica de Western Blot se observó que la proteína recombinante M reaccionó específicamente con los sueros policlonales utilizados, mientras que la proteína recombinante gP5 demostró una capacidad antigénica variable frente a los sueros utilizados. Mediante la técnica de neutralización viral y Western Blot, se analizaron las propiedades inmunogénicas de los anticuerpos obtenidos trás la inoculación de ratones Balb/c con las proteínas recombinantes. En la técnica de Neutralización Viral se obtuvieron títulos neutralizantes menores a 16 para cada uno de los sueros obtenidos utilizados de manera individual. Conclusión: Se expresaron correctamente las dos proteínas en este sistema de expresión. La capacidad antigénica de ambas proteínas evidenció ser baja pero específica.