Efecto de la suplementación con manganeso al medio de cultivo sobre la integridad del ADN en células del cúmulus cultivadas in vitro.

ANCHORDOQUY, J.P., ANCHORDOQUY, J.M., MATTIOLI, G., ROSA, D.E., PICCO, S.J., SEOANE, A. Y FURNUS, C.

Viedma

Congreso; 33/ Congreso Argentino de Producción Animal; 2010

Asociación Argentina de Producción Animal (AAPA)

El manganeso (Mn) es un elemento traza esencial. La deficiencia de Mn, usualmente provocada por una carencia nutricional, se caracteriza por la paulatina disminución en la actividad de diferentes enzimas Mn-dependientes. Dentro de estas enzimas se encuentra la Mn superóxido dismutasa, la cual posee un rol importante en el mantenimiento del estatus antioxidante celular. Las células del cúmulus, que rodean a los ovocitos durante la maduración, juegan un rol importante en la capacidad de desarrollo posterior de estos hasta el estadio de blastocisto. Esto se debe a que las células se hallan unidas metabólicamente a través de uniones GAP que conectan a las células del cúmulus entre sí y con el ovocito, interviniendo en el soporte metabólico del mismo. Estudios recientes han demostrado que el estrés oxidativo que sufren las células del cúmulus durante la maduración in vitro (MIV) puede provocar daño en su ADN. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el daño del ADN de las células del cúmulus que forman el complejo ovocito-cúmulus (COCs), expuestas a diferentes concentraciones de Mn durante la MIV de ovocitos bovinos. Para ello, se obtuvieron COCs de ovarios de vaquillonas faenadas. Los ovarios se colectaron en días diferentes (n=3 repeticiones) y en cada día se recogieron 200 COCs. Los 200 COCs se dividieron en 4 grupos de 50 COCs (unidad experimental) por tratamiento. El medio de maduración fue TCM 199 suplementado con 5% de suero bovino fetal, FSH y LH. La concentración de Mn en este medio es de 0,03 μg/dl, aportado exclusivamente por el suero fetal. Los tratamientos consistieron en el agregado de Mn al medio de maduración de modo de alcanzar las concentraciones indicativas de carencia severa (CS), moderada (CM) o normalidad (N) en plasma (0,23; 0,43 y 0,63 μg/dl respectivamente), quedando un tratamiento control (C) sin suplementar (0,03 μg/dl). Los COCs se cultivaron in vitro durante 24 hs a 39/C en atmósfera gaseada con 5% de CO2. El daño en el ADN de las células del cúmulus se determinó con el ensayo cometa en su versión alcalina. Esta técnica consiste en la electroforesis de células aisladas, donde solo el ADN fragmentado migra dando una imagen similar a la cola de un cometa. El daño en el ADN se evaluó por Olive Tail Moment (OTM). Este índice relaciona la cantidad de ADN que migró debido a su fragmentación (cola del cometa), con la que no lo hizo (cabeza del cometa). Para este análisis se utilizaron 50 células de cada unidad experimental. Los promedios de OTM se analizaron como un diseño de bloques completamente aleatorio con el procedimiento mixto SAS 9.1. Se consideró bloque como un factor aleatorio y tratamiento como factor fijo. Para la comparación de las medias de los tratamientos se realizó un contraste polinomial lineal, cuadrático y cúbico. Los resultados mostraron una disminución lineal del OTM (p